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考马斯亮蓝的可溶性蛋白测定原理

上海榕柏生物技术有限公司

2012/5/8 10:00:08

考马斯亮蓝G250(GooMAssIe BrIllIAnT Blue G250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G250在游离状态下呈红色,在稀酸溶液中,当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者zui大光吸收在465nM,后者在595nM。在一定蛋白质浓度范围内(1100μg),蛋白质与色素结合物在595nM波长下的光吸收与蛋白质含量成正比,故可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G250结合在2Min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速,其结合物在室温下1H内保持稳定。该反应快速灵敏灵敏度比FolIn-酚法还高4、易于操作、干扰物质少考马斯亮蓝G250蛋白质通过范德华力结合,受蛋白质的特异性影响较小,除组蛋白外,其他不同种类蛋白质染色强度差异不大,可测定微克级蛋白质含量,是一种比较好的蛋白质定量法。但此方法也存在其缺点,考马斯亮蓝在蛋白质含量很高时线性关系偏低,且不同来源蛋白质与色素结合状况有差异。 

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