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2024/10/29 17:13:30【原理概述】
本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术:在常温恒温下,特殊修饰的反转录酶利用特异性引物和模板RNA合成cDNA链,反应体系中的重组酶、单链 DNA 结合蛋白和 DNA 聚合酶以新合成的 cDNA 链为模板进行快速核酸扩增反应。依赖nfo 酶的作用,加入根据模板设计的特异的分子探针,使用胶体金技术(三明治夹心法)可以对最终结果进行检测。
【产品特点】
本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短(仅需 12 min)等优点,反应组分为干粉状态,操作简便,易于保存。本试剂对设备要求低,金属浴、水浴锅等即可进行反应操作,无需购买 PCR 扩增仪等价格高昂的专属设备。
【引物设计】
建议使用长度在 30-35 bp 的引物,引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度;下游引物的 5’端标记一个修饰基团(常用生物素)。引物设计避免形成二级结构而影响扩增;扩增
子长度建议在 150-500 bp。
【荧光探针设计】
在上下游引物中间,设计一段长度为46-52nt与目的片段互补的序列;5’端修饰一个抗原标记(典型 FAM);在 5’端和 3’末端的中部位置标记一个 dSpacer(四氢呋喃,THF),作为 nfo 的识别位点;3’末端标记一个修饰基团,例如胺基、磷酸基团或 C3-Spacer 等。
【试剂盒组成】
组成 | 含量 |
A buffer | 1.6 mL×1管 |
B buffer | 150 μL×1管 |
试剂 | 48份 |
使用说明书 | 1份 |
注:考虑到核酸降解问题,RNA 系列产品不提供正对照模板和引物探针。
【试剂盒储存】
1.运输温度:≤ 20 ºC的恒温环境;
2.储存条件:储存温度 ≤ -20 °C(± 5 °C)恒温环境,避光保存,避免重压、反复冻融;
3.产品有效期:14个月;
4.生产日期见外包装。
【注意事项】
由于试剂盒灵敏度非常高,在进行反应时请注意避免核酸污染,并设置空白对照;
使用时请取出实验所需的 MIRA 反应单元的数量,剩余部分请置于存储条件下。
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