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2024/11/5 9:45:51长时程活细胞成像系统Incucyte®因其简便的实验设置和分析流程、以及广泛的应用方向,深受用户喜爱。在体外细胞水平的实验中发挥着重要作用。引用其数据的CNS正刊上论文数量众多,目前使用到Incucyte®发表的CNS正刊总数已经达到约200篇,往期链接如下:
活细胞成像刷屏!一天两篇CELL揭秘神经退行性疾病和肿瘤免疫新疗法
一天三篇CNS,Incucyte® 开启细胞研究新速度
一周3篇Nature:Incucyte® 上演科研帽子戏法!
最近的2024年10月,利用Incucyte® 发CNS正刊的数量又达到了新高度,两天5篇NATURE!
他们又是如何应用Incucyte® 的呢?
免疫细胞和靶细胞共培养[1]
中毒性表皮坏死松解症(TEN)是一种由常见药物诱导的致命皮肤反应,已成为一个新兴的公共卫生问题。TEN患者会因角质形成细胞死亡,而出现严重和突然的表皮脱离。通过蛋白质组学分析,发现TEN患者免疫细胞和角质形成细胞区室中I型和II型干扰素的显著富集。Incucyte® 体外实验发现,使用JAK抑制剂托法替尼( tofacitinib)降低了角质形成细胞的细胞毒性。体内口服给药改善了两种不同的TEN小鼠模型的临床和组织学疾病严重程度。
图1. Incucyte® 测试:自体共培养模型中,活化的外周血单核细胞(PBMC)在5小时内有效杀死角质形成细胞,并且这种作用被托法替尼以剂量依赖性方式抑制。每隔两个小时测试一次,对死亡的角质形成细胞进行统计。
Incucyte® 有多个板位,可以满足多个实验组的高通量测定。
细胞凋亡[2]
三阴性乳腺癌 (TNBC)因其高度侵袭性和高复发率而令人谈虎色变,迫切需要开发更有效的治疗方法。本文发现,AKT抑制剂与组蛋白甲基转移酶EZH2抑制剂的药物具有协同作用,并在体内多个TNBC模型中促进持续的肿瘤消退,明确了其药理作用。Incucyte® 被用于体外检测药物对肿瘤细胞系的杀伤作用。
图2. Incucyte® 测试结果:NucLight Rapid Red试剂 (Sartorius,4717)标记细胞,用Cytotox Green (Sartorius,4633)监测细胞毒性。每2小时采集一次图像,持续5天。使用Incucyte®软件通过量化overlay的NucLight-red和Cytotox-green双阳性细胞数(即死亡的细胞数)除以 NucLight-red 阳性细胞的总数来确定细胞毒性细胞的百分比。
Incucyte®有完善的活细胞试剂,并提供相应的protocol,以及overlay分析等软件功能。
划痕实验[3]
人类产前皮肤由先天免疫细胞(包括巨噬细胞)组成,但这些细胞是否仅在免疫方面发挥作用,还是在形态发生中具有其他功能,尚不清楚。本文汇编了一份全面的产前人类皮肤多组学参考图谱,结合单细胞和空间转录组学数据,表征了皮肤的微解剖组织生态位。该图谱揭示了非免疫细胞和免疫细胞之间的串扰是毛囊形成的基础,与无疤痕伤口愈合有关,对皮肤血管生成至关重要。
图3. Incucyte® 划痕测试:成纤维细胞与巨噬细胞共培养可以增加伤口愈合。
Incucyte® 有专门的工具可以方便的创造一致的划痕。
两种细胞的竞争[4]
晚期尿路上皮癌(UC)是一种经常致命的疾病,具有显著的遗传异质性。化疗会诱导数百个晚期亚克隆突变的爆发。通过基因组计算工具观察到,形成染色体外DNA (ecDNA)的SV(复杂结构变异)具有频繁的高拷贝数环状扩增子特征,例如尿路上皮癌中的大多数 CCND1(G1/S-特异性周期蛋白-D1基因),并包含额外的DNA片段并导致治疗耐药性的进化。在竞争试验中,在顺铂或载体对照存在下,共培养等数量的具有GFP标记的空载体和mCherry标记的CCDN1游离型ecDNA的UMUC1细胞(CCDN1 UMUC1),使用Incucyte®活细胞成像系统测量 mCherry/GFP荧光信号的比率来监测对化疗的适应性。
图4. 用Incucyte®监测4天的mCherry/GFP细胞比例示意图(6个小时拍摄一次),以追踪肿瘤细胞对化疗的适应性
图5. CCND31 UMUC1细胞与对照细胞的比率,化疗药物顺铂的处理组明显高于对照,说明CCND31 UMUC1细胞对化疗有更佳的适应性
Incucyte®有多个荧光通道可以对多种细胞进行追踪。
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Incucyte®什么优点呢?
只要放好您的细胞,其他交给Incucyte®吧!祝愿大家都能用Incucyte®发好文章!
Incucyte®长时程活细成像系统应用文集
-参考文献-
[1]Spatial proteomics identifies JAKi as treatment for a lethal skin disease | Nature
[2]AKT and EZH2 inhibitors kill TNBCs by hijacking mechanisms of involution | Nature
[3[A prenatal skin atlas reveals immune regulation of human skin morphogenesis | Nature
[4]The interplay of mutagenesis and ecDNA shapes urothelial cancer evolution | Nature