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2024/11/5 17:51:33做过DNA回收的小伙伴都知道,DNA片段回收方法大致包含以下步骤:DNA片段在适当浓度的琼脂糖凝胶中,通上一定电压进行电泳,不同大小的DNA分子由于迁移率的不同而分离开。切下带有所需DNA片段的凝胶,用冻融法、玻璃奶回收法或商品化胶回收试剂盒将目的片段回收纯化。
传统胶回收大致会用到以下一些工具仪器:
← 依次为水平电泳槽、电泳槽配套电源、凝胶紫外灯、成像仪 →
此外还需要一些试剂耗材比如:TAE或者TBE (电泳缓冲液)、凝胶染液 (如: 溴化乙锭, SYBR Gold)、琼脂糖......
传统胶回收法要把整个目的片段所在位置的胶全部回收。所以为了减少胶的体积,我们通常会用相对比较薄的胶来跑电泳,或者采用薄而宽的梳子来跑胶。但是当DNA浓度不够时,想要胶小点就无法实现。
紫外灯下切胶时,易引入外源DNA的污染;
操作人员需要做好紫外光的防护工作。
若回收时胶块未溶解、凝胶放置太久而失水干燥、电泳pH偏高或偏低、电泳缓冲液的浓度过高或陈旧,均可导致DNA回收效率低或者未回收到目的片段。
鉴于传统胶回收法的种种不便和潜在“深坑”,Lonza向大家提供了一个便捷的选择:FlashGel System闪胶系统——一个超快的、释放双手的DNA/RNA分离和DNA回收设备。
FlashGel System全家福
(相机、系统电源、含电泳液的预制凝胶、电泳槽、系统配套Kit、护目镜)
系统搭配:小巧便携组件,全套Kit可供选择。
特点:无需配制凝胶,无需配缓冲液,非紫外光拍照,实时分离情况可视化,软件支持下载图像到笔记本电脑/手机上。
FlashGel™系统可以为您做些什么
1、5分钟内DNA分离。
2、10分钟内直接从盒中回收或纯化DNA样本,无需条带切除
3、30分钟内分离RNA,没有危险试剂或RNases 污染。
应用一:用于DNA分离(具有预制凝胶盒,用于分离从 50 bp到 4 kb的核酸)
优点
1) 5分钟内DNA分离,实时可视条带迁移
2) 在工作台上拍摄凝胶,无紫外线,图像可实时记录
3) 可检测<0.1 ng DNA,具有优异的灵敏度和分辨率,灵敏度是溴化乙啶的20倍
(核酸电泳实时观看)
应用二:用于DNA回收(简单的DNA回收,不需要条带切除)
优点
1) 在10分钟内分离和回收DNA
2) 直接从盒中回收DNA样本,不进行条带切除或纯化
3) 在没有紫外线的情况下可视化DNA回收,获得80%-100%的效率
(预制双排孔凝胶,内含电泳液,灵活实现一排上样一排回收,无需切胶)
应用三:用于RNA分离(快速和方便的定性检查的RNA分离)
优点
1) 在工作台上不到30分钟内分离RNA
2) 检测每个条带的<10 ng RNA,具有优异的灵敏度和分辨率
3) 没有危险试剂或RNases污染
FlashGel亮点总结
1、操作简单:无需配制凝胶、无需配制缓冲液,提供预制胶盒【分离、回收】,只需将胶盒放入电泳槽中,混合样品和loading dye进行上样,即可开始跑胶
2、高效快捷:特制电泳槽采用275V高电压,只需 2-7min 即可完成50bp-4kb DNA的分离,10-20min 即可完成RNA的分离,5-10min 即可完成片段回收。最多可同时分离34个样品
3、高灵敏度:与EB (溴化乙锭) 相比,FlashGel染料灵敏度提高5-20倍,可检测0.1ng的DNA,或10ng的RNA,分析时可降低核酸浓度,减少上样体积,节省珍贵样品
4、无需紫外光下操作:依靠Dark Reader技术,无需紫外光照射,核酸发光安全,可裸眼实时观察跑胶情况,可方便地操作片段回收
5、图像采集:无需暗房和紫外线,FlashGel Camera 系统通过一个封闭罩内的相机,可USB连接电脑,可通过屏幕观察DNA迁移,并5min内完成凝胶图像采集
FlashGel闪胶系统很大程度的解放了科研小伙伴的双手,让核酸回收变得简易且高效,小东已经看到大家的双脚在向高分文章迈进了!