手套和防护:试剂盒中的终止液是酸性的,操作时请记得戴手套,避免接触皮肤和眼睛。如果不小心接触到,立即用大量清水冲洗。
温度控制:试剂盒要放在2~8℃的冰箱里保存,并在有效期内使用。
标准品保存:用不完的标准品,要么丢掉,要么分装后放在-20~-80℃的冰箱里。
室温恢复:使用前,让试剂在室温下恢复30分钟,并确保所有成分和样品都充分混匀。
一次性用品:实验中使用一次性EP管、枪头、封板膜和干净的塑料容器,以避免交叉污染。
标准操作:实验中,对标准品和样本进行复孔检测,并保持试剂加入顺序一致。每次检测都需要做标准曲线。
全部清洗:洗板时去除残留液体,以获得最佳结果。洗完后立即进行下一步,不要让微孔板干掉。
轻柔混匀:在重溶或混匀标准品时,要轻柔操作,避免产生气泡。
显色底物:显色底物添加前应无色,并避光保存。
终止液顺序:终止液的添加顺序应与显色底物相同。添加后,底物颜色应从蓝变黄。
去除沉淀:去除样本中可见的沉淀,避免使用溶血或高血脂样本,以免影响结果。
稀释检测:如果样本中靶标物浓度过高,需要适当稀释后再检测。正式实验前,先做预实验确定稀释倍数。
如果样本中目标物质的浓度太高,超过了测试范围,就需要稀释,以便准确测量。
稀释后,样本信号应在标准曲线中间范围内,以确保数据准确。
大倍数稀释时,建议分步进行,比如先稀释10倍,再从这个基础上稀释20倍,得到准确的200倍稀释液。
取样时,至少5微升,以减少操作误差。
正式实验前,先做小实验,确定样本需要稀释的倍数。
特别是大倍数稀释时,要规范操作,减少误差。
稀释后的样本要妥善保存,避免反复冻融,防止蛋白质降解。建议分装后放在-20℃或-70℃的冰箱里。
不同类型的样本需要不同的预处理方法,合适的预处理是确保实验准确的关键。
稀释样本时,最好用和标准品一样的稀释液,以保持实验条件一致。