揭示突触的结构和功能一直是研究的重点。尽管如此，传统显微镜技术中的衍射障碍限制了分辨率，从而限制了对突触结构和功能的洞察。超分辨率显微镜能够以前没有的精确度可视化突触结构。这种能力改变了我们检查突触间隙内蛋白质的空间组织、活动区域和突触后密度的能力，使我们能够非常详细地进行观察。它促进了在分子水平上对突触组分的异质性和动态性的研究。
艾美捷Synaptic Systems（SySy）部分符合STED超分辨率显微镜特定要求的抗体：
Cat. No. Product Description Application Quantity
141 111AbOR Bassoon, mouse, monoclonal, purified IgG, AbberiorStar ORANGE K.O. ICC 100 µg
141 111AbRED Bassoon, mouse, monoclonal, purified IgG, AbberiorStar RED K.O. ICC 100 µg
160 111AbOR Homer1b/c, mouse, monoclonal, purified IgG, AbberiorStar ORANGE ICC 100 µg
160 111AbRED Homer1b/c, mouse, monoclonal, purified IgG, AbberiorStar RED ICC 100 µg
162 311AbOR Shank3, mouse, monoclonal, purified IgG, AbberiorStar ORANGE ICC 100 µg
162 311AbRED Shank3, mouse, monoclonal, purified IgG, AbberiorStar RED ICC 100 µg
106 011AbOR Synapsin1, mouse, monoclonal, purified IgG, AbberiorStar ORANGE K.O. ICC 100 µg
106 011AbRED Synapsin1, mouse, monoclonal, purified IgG, AbberiorStar RED K.O. ICC 100 µg
左图：使用STED显微技术，前突触的Bassoon蛋白用abberior STAR RED标记，后突触的Homer1蛋白用abberior STAR ORANGE标记，显示出清晰分离的突触结构。
右图：Bassoon和Homer1在突触定位的示意图。
STED显微技术小课堂：
在纳米级光学显微镜技术，特别是STED（受激发射损耗）显微技术出现之前，研究人员受到传统光学显微镜衍射极限的限制。这一限制将分辨率限制在大约200-300纳米的横向和500-700纳米的轴向上。STED显微技术的概念由Stefan Hell和Jan Wichmann在1994年提出，并在2000年实验实现（Hell和Wichmann，1994年，Klar等人，2000年）。STED显微技术基于传统的共聚焦激光扫描配置，但除了激发激光外，还包括一个第二红色的、甜甜圈形状的STED激光，其中心强度为零。这样，除了甜甜圈中心的分子外，所有分子都被耗尽。这种配置确保了由中心光束激发的荧光团被STED光束迅速去激发，而任何荧光都来自STED甜甜圈中心的荧光团。荧光信号被锐化，达到了30-70纳米的横向分辨率。衍射障碍被打破。
成功进行STED成像的先决条件
良好的成像结果取决于两个条件：良好的荧光染料和特定的抗体。STED的理想荧光探针必须具备几个关键属性：对STED光束有响应以实现高效去激发，优化的吸收和发射光谱与STED系统中可用的激光线对齐，以及在重复激发和去激发周期中抵抗光漂白。为了实现最佳的STED成像，abberior，STED染料的先驱公司，提供特别优化的荧光染料。abberior STAR ORANGE和STAR RED以其z越的光稳定性、定制的光谱特性、高效的耗尽能力、高量子产率、与生物样本的兼容性和最小的背景噪声而闻名，是双色STED @775纳米的w美组合。
在STED显微技术中实现高空间分辨率，用于染色活体或固定样本的抗体选择至关重要。SYSY抗体显示出高特异性和亲和力，使它们成为显微镜分析中的精确而强大的工具。使用经过良好表征的单克隆抗体，与单一表位结合具有高特异性，减少了染色模式的变异性和与其他蛋白质或分子发生交叉反应的潜力。
直接耦合的优势
与使用标记的二抗的间接标记相比，直接耦合显示出一系列主要优势。除了消除了对二抗的需求外，直接耦合减少了空间位阻，这在间接标记中可能会降低一抗对目标的亲和力和特异性。此外，它通过非特异性二抗结合非目标蛋白质（交叉反应）减少了背景噪声，缩短了荧光团和抗原之间的距离，并防止了多个二抗结合到单个一抗上对单个分子的空间排列造成掩盖（Früh等人，2021年）。
