薄层色谱分析(TLC)是快速分离分析少量物质的一种很重要的实验技术，主要用于药品的鉴别、 杂质检查，也用于跟踪化学反应进程。

薄层色谱法基本原理

薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在流动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过程中，连续地产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分互相分离的目的。

薄层色谱法基本原理

薄层色谱法经典操作

01 点样

点样一般为圆点（不能太大）点样基线距底边0.5~1.0 cm，点样直径为1-2 mm 点间距离约为0.5~1.0 cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜；

02 展开

1、化合物分离效率大小用 Rf（化合物距离基线的距离除以溶剂的前沿距基线的距离 ）值表达，Rf值最-好在0.15~0.85之间，尽量控制主要物质Rf值在0.3~0.7之 间。

2、展开剂的选择：常用的溶剂组合有：石油醚/乙酸乙酯、二氯甲烷/甲醇、石油醚/丙酮、石油醚/二氯甲烷、乙酸乙酯/甲醇、乙酸乙酯/四氢呋喃、氯仿/乙酸乙酯 、乙睛/水等。

03 显色

遵循：一看、二照、三碘、四显。首先在日光下观察，划岀有色物质的斑点位置； 在紫外灯下观察有无暗斑或荧光斑点；紫外吸收很弱的物质，可以用碘缸进行显色 无色又无紫外吸收且在碘缸中不显色的物质，可以根据化合物的显色基团选择显色剂显色。

薄层色谱法案例分析

01 薄层色谱法TLC拖尾现象

① 首先考虑的是样品浓度过大，硅胶板过载导致。这种情况直接降低样品浓度或者减少上样量。

② 样品对硅胶的吸附能力过强导致的拖尾。对不同体系加入不同的调节剂，酸体系加冰醋酸，碱体系加氨水/三乙胺。

薄层色谱法TLC拖尾现象

02 薄层色谱法TLC边缘效应

原因：当展开剂在薄层上展开时，极性较弱的展开剂和挥发较强的展开剂在薄层两边较易挥发，它们在薄层两侧的浓度比在中部的浓度小，因此产生了边缘效应。

解决方案：点样时，板子两边空出0.5 cm边际

03 薄层色谱法TLC分离效果差

原因：分离效果差的主要原因包括展开剂的选择、展开方式以及实验环境条件。

解决方案：根据样品的性质选择合适极性/体系的展开剂；避免点样过量或不均匀；优化展开方式，选择最-适合的上行或下行展开方式；控制实验环境的温湿度，确保硅胶不吸潮。

04 薄层色谱法TLC样品跑散/冲顶

原因：可能是样品中有大极性溶剂、展开剂极性太大、硅胶板吸潮。

解决方案：在点板前，先用吹风机将硅胶板吹干，点样后，再将样品溶剂吹干，选用极性适合的展开剂。

原因：可能包括展开剂选择不佳、样品浓度过低、显色剂选择不当等。

解决方案：

① 展开剂选择不佳，可能导致斑点重合或不明显。可尝试不同类型、比例的展开剂，多次尝试以找到最-佳的展开剂组合。

② 调整样品的浓度，以便在薄层色谱板上形成更明显的斑点。

③ 选择正确的显色剂对样品的显色起到至关重要的作 用，如含氮（伯、仲）化合物选用茚三酮显色剂，含还原性基团化合物（羟基、氨基 、醛）选用高猛酸钾显色剂，生物碱选择硫酸铈显色剂等。

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