ELISA在食品微生物检测中的应用方法

1. 直接ELISA法

直接ELISA法适用于检测食品中的微生物抗原。具体步骤如下：

· 将微生物抗原包被在微孔板上。

· 加入待测样本，样本中的抗体与包被的抗原结合。

· 加入酶标记的二抗，与样本中的抗体结合。

· 洗涤后加入底物，显色反应后测定吸光度值，从而定量测定样本中的抗体含量。

2. 间接ELISA法

间接ELISA法适用于检测食品中的微生物抗体。具体步骤如下：

· 将已知微生物抗原包被在微孔板上。

· 加入待测样本，样本中的抗体与包被的抗原结合。

· 加入酶标记的抗抗体（即二抗），与样本中的抗体结合。

· 洗涤后加入底物，显色反应后测定吸光度值，从而定量测定样本中的抗体含量。

3. 双抗体夹心法

双抗体夹心法适用于检测食品中的大分子微生物抗原。具体步骤如下：

· 将已知的第一抗体包被在微孔板上。

· 加入待测样本，样本中的抗原与第一抗体结合。

· 加入酶标记的第二抗体，与抗原的另一表位结合，形成双抗体夹心复合物。

· 洗涤后加入底物，显色反应后测定吸光度值，从而定量测定样本中的抗原含量。

4. 竞争ELISA法

竞争ELISA法适用于检测食品中未知浓度的微生物抗原。具体步骤如下：

· 将已知浓度的微生物抗原包被在微孔板上。

· 同时加入待测样本和酶标记的抗原，二者竞争与固相抗原结合。

· 洗涤后加入底物，显色反应后测定吸光度值。由于待测样本中抗原浓度的不同，与固相抗原结合的酶标记抗原量也会不同，从而影响显色反应的深浅。通过标准曲线可定量测定样本中的抗原含量。

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