在微生物学和生物医药领域，菌落形成单位（CFU, Colony Forming Units）是一个常用的量化指标，用于评估微生物样品中的活菌数量。CFU的测定通过稀释、接种和培养微生物样品，观察形成的独立菌落来实现。这一方法广泛应用于水质监测、食品安全检测、生物制药过程控制等多个领域。本文将详细介绍CFU测定的实验操作步骤。
实验目的
本实验旨在通过标准的微生物学方法，测定样品中的CFU数量，从而评估样品的微生物污染程度或活菌含量。
实验材料
无菌培养皿
无菌试管
无菌吸管
无菌接种环
酒精灯
适当的培养基（如牛肉膏蛋白胨固体培养基）
待测样品（如水样、食品样品等）
培养箱
显微镜、
菌落计数器
实验步骤
样品准备：
根据样品类型（固体或液体），进行适当处理。例如，对于固体样品，进行均质化或研磨；对于液体样品，进行振摇以混匀。
对样品进行适当稀释，以获得适宜的接种浓度。一般使用灭菌生理盐水作为稀释液。
稀释与接种：
按照无菌操作规范，将样品进行连续稀释，通常选择10倍系列稀释。
使用无菌吸管吸取一定体积的稀释液，接种到含有适当培养基的无菌培养皿中。每个稀释度应接种多个培养皿以提高准确性。
将培养皿内的培养基与稀释液充分混匀，可采用画圆或回转的方式，避免液体溅到培养皿边缘。
培养：
将接种后的培养皿倒置于培养箱中，设定适宜的温度和湿度条件进行培养。培养时间根据微生物种类和生长速度而定，通常为24-48小时。
菌落计数：
培养结束后，使用放大镜或菌落计数器观察并记录每个培养皿上的菌落数量。
选择菌落数在30-300之间的培养皿进行计数，这是为了保证计数的准确性和可靠性。如果菌落数过多或过少，可能需要调整稀释度或重新进行实验。
计算同一稀释度下多个培养皿的平均菌落数，然后乘以稀释倍数，得到每毫升（或每克）样品中的CFU数量。
数据处理与报告：
根据实验结果，计算CFU的数值，并进行适当的统计分析。
报告结果时，应注明稀释倍数、培养条件以及菌落计数的具体方法。
注意事项
在整个实验过程中，必须严格遵守无菌操作规范，以防止污染。
培养基的种类和配方应根据待测微生物的种类和特性进行选择。
接种时应确保稀释液和培养基充分混匀，以避免菌落分布不均。
计数时应选择无蔓延菌落生长的培养皿进行计数，如果平板上有大片菌落生长，则不宜采用该平板的计数结果。
结论
CFU的测定是一种简单而有效的微生物计数方法，广泛应用于各种微生物学研究和应用领域。通过标准的实验操作步骤和严格的实验条件控制，可以获得准确可靠的CFU数值，为微生物污染程度的评估和生物制品的质量控制提供重要依据。
