判断细胞是否被污染可以从以下几个方面入手：
一、肉眼观察
1. 培养基外观
- 浑浊度：正常的细胞培养基是澄清透明的。如果发现培养基变得浑浊，这是细胞可能被细菌污染的一个明显迹象。细菌在培养基中大量繁殖会导致培养基变浑浊，就像一杯清水变成了有杂质的浑水一样。例如，常见的大肠杆菌污染会使培养基在短时间内（通常1 - 2天）变得很浑浊。
- 颜色变化：培养基的颜色也能提供线索。多数细胞培养基含有pH指示剂，如酚红。正常情况下，细胞代谢会使培养基的pH值发生一定变化，颜色也会相应改变。但如果颜色变化异常，可能提示污染。比如，真菌污染可能会使培养基颜色变深、变黑，这是因为真菌在生长过程中会产生一些代谢产物改变培养基的成分和颜色。
- 漂浮物或沉淀物：除了浑浊和颜色变化外，观察培养基中是否有漂浮物或沉淀物也很重要。如果有白色、黑色或其他颜色的丝状、絮状漂浮物，可能是真菌污染。一些细菌污染也可能产生颗粒状的沉淀物。例如，葡萄球菌污染可能会在培养基底部出现一些白色的沉淀小颗粒。
2. 细胞培养瓶表面
- 在培养瓶的内表面，如果出现菌斑、霉斑，很可能是真菌污染。这些菌斑可能是白色、黑色、绿色等不同颜色，形状不规则，大小也不一。例如，黑曲霉污染时，在培养瓶壁上可以看到黑色的菌斑，而且菌斑会随着时间逐渐扩大。
二、显微镜观察
1.低倍镜观察（10x - 40x）
- 细胞形态和密度：正常细胞在显微镜下有特定的形态和生长方式。如果细胞形态变得不规则、肿胀、破裂或者细胞密度突然降低（排除正常的细胞凋亡等情况），可能是受到了污染。例如，当细胞被细菌污染时，细菌产生的毒素可能会导致细胞破裂，在视野中可以看到细胞碎片增多。
- 运动的微生物：细菌和一些原生动物污染在低倍镜下可以观察到运动的颗粒。细菌通常呈现小的、快速移动的颗粒状，它们的运动方式多样，有的是直线运动，有的是布朗运动。例如，假单胞菌在视野中会快速地游动，很容易被观察到。
2. 高倍镜观察（100x - 400x）
- 细菌形态：在高倍镜下可以更清楚地看到细菌的形态，如球菌（圆形）、杆菌（杆状）、螺旋菌（螺旋状）等。这有助于初步判断污染细菌的类型。例如，金黄色葡萄球菌呈球形，多个聚集在一起像葡萄一样；大肠杆菌则是杆状的细菌。
- 真菌结构：对于真菌污染，可以看到菌丝和孢子。菌丝是丝状的结构，粗细不均，有分支；孢子呈圆形或椭圆形。例如，青霉菌污染时可以看到典型的扫帚状分支的菌丝和绿色的孢子。
- 支原体观察：支原体比细菌小，在普通光学显微镜下不容易看清其形态。但在高倍镜下，如果仔细观察，有时可以看到一些微小的、类似油煎蛋样的结构（这是支原体在细胞表面生长形成的典型形态），不过这种观察需要一定的经验和仔细的观察。
三、其他检测方法
1. 细胞生长状态
- 生长速度：正常细胞有一定的生长曲线，包括潜伏期、对数生长期和平台期。如果细胞生长速度明显变慢或者停止生长，除了考虑培养条件（如营养不足、温度不合适等）外，也要怀疑是否有污染。例如，支原体污染会使细胞的生长速度显著降低，因为支原体消耗细胞培养基中的营养成分，并且会干扰细胞的代谢过程。
- 代谢产物变化：可以通过检测细胞培养上清液中的代谢产物来判断是否污染。例如，乳酸脱氢酶（LDH）是一种细胞内酶，当细胞受到污染损伤时，LDH会释放到培养基中，使上清液中LDH的含量升高。 2. 2. 检测试剂盒
- 支原体检测试剂盒：由于支原体污染不易用显微镜观察到，使用支原体检测试剂盒是一种有效的检测方法。例如，PCR - 基于检测试剂盒可以检测支原体的特定基因序列，荧光染色检测试剂盒可以通过荧光标记的抗体来识别支原体。这些试剂盒具有较高的灵敏度和特异性，能够准确地判断细胞是否存在支原体污染。
- 细菌和真菌检测试剂盒：也有一些用于快速检测细菌和真菌的试剂盒，它们通常基于抗原 - 抗体反应或者微生物的特定代谢产物检测原理。这些试剂盒可以在短时间内（如几小时内）给出检测结果，帮助确定是否存在污染。
