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使用紫外-可见光谱法对蛋白质和核酸超微量样品进行浓度分析

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2024/11/14 16:05:19

摘要使用配备 TrayCell 2.0 超微量比色池的 Agilent Cary 60 紫外-可见分光光度计分析了蛋白质和核酸样品。无损测量微量样品有利于样品保存、样品处理,并且无需执行繁琐且容易出错的稀释操作。使用 TrayCell 2.0 既快捷又简单,可帮助用户改进工作流程。


前言现代化实验室越来越多地在寻求无需稀释即可分析 DNA、RNA 和蛋白质等样品的准确、精确且易于使用的方法。Agilent Cary 60 紫外-可见分光光度计配备 TrayCell 2.0 超微量比色池,该比色池带有合适光程的盖子,为直接测量超微量样品提供了一个方便且易于使用的平台。可以分别使用短光程和长光程盖子分析高浓度和低浓度样品,确保宽动态范围。该方法是一种无损分析方法,可以回收珍贵的样品,并且 TrayCell2.0 易于清洁,提高了该技术的可用性。Cary 60 紫外-可见分光光度计(图 1)专为重复的常规应用以及更高级的应用而设计。这款双光束仪器配备强大、高度聚焦的脉冲氙灯。这种灯可大幅提高穿过样品的光通量,确保高质量的光度测量结果。因此,Cary 60 紫外-可见分光光度计是准确且可重现地测量少量样品的理想之选。脉冲氙灯仅在采集数据时照射样品,保护敏感样品免受光降解并降低功耗。此外,Cary 60 紫外-可见分光光度计不受室光干扰带来的失真影响。Cary 60 紫外-可见分光光度计的室光免疫性能支持在开放的样品室中操作,易于使用,并且降低了由于处理错误而导致数据质量降低的风险。与因仪器限制而可能产生不准确或不可重复结果的现有方法相比,高性能 Cary 60 紫外-可见分光光度计可提供更优质的数据。


迈向更可持续发展的实验室Cary 60 紫外-可见分光光度计的环境影响已经过独立审计,并获得了由 My Green Lab 认证的 ACT(归责性、一致性和透明度)标签。该标签提供了有关 Cary 60 紫外-可见分光光度计在其整个生命周期中对环境影响的信息(图 2)。Cary 60 紫外-可见分光光度计改善了实验室对环境的影响,而不会影响分析效率或科学进步。

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在典型的吸光度测量中,TrayCell 2.0 超微量比色池(货号 G6871C)置于 Cary 60 紫外-可见分光光度计的标准样品池支架中。TrayCell 2.0 可以配备可更换盖,提供四种不同的光程:2.0 mm(货号 G6871-68005)、1.0 mm(货号G6871-68004)、0.2 mm(货号 G6871-68003)和 0.1 mm(货号 G6871-68002),具有宽动态范围。将超微量样品(0.7–10 μL,取决于光程)吸取至 TrayCell 2.0 的测量窗,然后将具有选定光程的相应盖子置于上方。来自 Cary 60 紫外可见分光光度计的高度聚焦光束经过 TrayCell 2.0 中的光纤直接穿过样品(图 3)。然后,光束被盖子中的反射镜反射回到分光光度计检测器中,重新穿过样品,如图 4 所示。

在将下一个样品置于 TrayCell 2.0 的测量窗之前,需要清洁窗片以及盖子内的反射镜。在清洁窗片期间,无需从样品池支架上取下 TrayCell 2.0。窗片与盖子内的反射镜之间准确的间距可确保准确的光程,并在每次测量中保持不变。在本研究中,使用配备 TrayCell 2.0 超微量比色池的 Cary 60紫外-可见分光光度计测量超微量蛋白质和 DNA 样品。使用TrayCell 2.0 的不同光程盖选件,以减少稀释,并扩展样品的可测量浓度范围。使用牛血清白蛋白 (BSA) 和鲱鱼精子 DNA样品,展示了配备 TrayCell 2.0 的 Cary 60 紫外-可见分光光度计的光度测量性能。


仪器和材料– Agilent Cary 60 紫外-可见分光光度计– TrayCell 2.0 超微量比色池– BSA 蛋白:将已知量的 BSA 蛋白(Sigma-Aldrich,CAS9048-46-8)溶解于 PBS 缓冲液(磷酸盐缓冲液)中,配制 400 mg/mL 储备液。连续稀释储备液,配制一组不同浓度的样品– 鲱鱼精子 DNA:将已知量的鲱鱼精子 DNA(Sigma-Aldrich,CAS 438545-06-3)溶解于 PBS 缓冲液中,配制 5 mg/mL储备液。连续稀释储备液,配制一组不同浓度的样品使用移液器将超微量 (3 µL) 样品置于测量窗上,并使用 AgilentCary WinUV 软件 5.1.3.1042 版进行数据采集。


结果与讨论低浓度下的光度测量重现性为了评估配备 TrayCell 2.0 的 Cary 60 紫外-可见分光光度计的可用吸光度范围,对高浓度和低浓度样品进行了测量。对于样品量有限的低浓度测量,TrayCell 2.0 是理想之选,因为它只需要超微量样品即可进行测量。此外,Cary 60 紫外-可见分光光度计足够灵敏,可以测量低浓度样品,而许多分光光度计的灵敏度不支持测量浓度低于 25 ng/µL 的样品。分光光度计在低浓度下的性能至关重要,因此需要执行波长扫描以确保观察到典型的样品曲线。使用配备 TrayCell 2.0(带 1.0 mm盖子)的 Cary 60 紫外-可见分光光度计对 20 ng/µL 鲱鱼精子DNA 样品进行十次重复波长扫描。该样品的吸光度为 0.04,相当于标准 10 mm 比色池中的 0.4 Abs。如图 5 所示,Cary60 紫外-可见分光光度计可进行高度可重现的波长扫描,这对于超微量分析十分重要。

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