ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。ELISA免疫分析是一种利用特定抗体与抗原或半抗原发生的高选择性高特异性识别和结合原理，对待测抗体或者抗原进行分析测定的方法。优化ELISA的重点之一在于洗涤。洗涤步骤可降低未结合抗体所引起的背景信号，从而增加分析的信噪比。每一步之间的洗涤确保只有特异的结合事件被保留，在最后一步产生信号。不充分的洗涤会导致差异和高背景，从而带来不理想的结果。
在做ELISA实验时，洗板有两种方法：手工法洗板和洗板机洗板。二者没有本质的差别，只要操作合乎要求，均能得到正确、可靠的结果。
手工洗板-重点:
手工洗板人为因素比较大，实验人员必须经验丰富，洗涤次数要足够，冲击力又不要太大，加入的洗液量以刚满反应孔为限，防止孔口内有游离酶未能洗净，同时防止孔与孔之间液体交叉。洗涤结束后扣干亦非常重要，否则易造成假阳性。每次洗完板后，在吸水纸上轻轻拍干，拍板时要垂直，避免交叉感染。用力不能过猛，防止抗原抗体复合物脱离;吸水纸要一次性使用，应使用不易脱落碎屑的吸水纸为宜。酶结合物不耐干燥，特别在较高的温度下更易失活，所以拍干的反应板应尽量缩短在空气中暴露的时间，时间越长，吸光度值越低。
手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种方法：
浸泡式:
1.吸干或甩干孔内反应液；
2.用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去）；
3.浸泡，即将洗涤液注满板孔，放置1～2分钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短；
4.吸干孔内液体。吸干应彻di，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干；
5.重复操作步骤3和4，洗涤3～4次（或按说明规定）。在间接法中如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间。
微量滴定板多采用浸泡式洗涤法。洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯C2H4载体与蛋白质的结合是疏水性的，非离子型洗涤剂既含疏水基团，也含亲水基团，其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键结合，从而削弱蛋白质与固相载体的结合，并借助于亲水基团和水分子的结合作用，使蛋白质回复到水溶液状态，从而脱离固相载体。
洗涤液中的非离子型洗涤剂一般是吐温20，其浓度可在0.05%～0.2%之间，高于0.2%时，可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低试验的灵敏度。
流水冲洗式:
流水冲洗法最初用于小珠载体的洗涤，洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置，使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗，持续冲洗2分钟后，吸干液体，再用蒸馏水浸泡2分钟，吸干即可。浸泡式犹如盆浴，流水冲洗式则好比淋浴，其洗涤效果更为彻di，且也简便、快速。
已有实验表明，流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压，让水流冲击板孔表面，洗涤效果更佳。
洗板机洗板-重点:
洗板机洗板人为因素少，速度快，条件恒定，但是使用洗板机洗板时应注意以下三个关键点。
洗涤参数:
主要的参数是洗涤量。自动洗板机会分配洗涤液。如果你之前遭遇过高背景，那么不要犹豫，将洗涤量调为高，最好是比包被体积更高。太少的洗涤液会让一部分分析表面洗涤不到，从而明显增加背景。所有反应孔的洗涤量必须相同。
江莱生物ELISA试剂盒的使用手册中列出包被量。我们建议使用350µl洗涤液进行洗涤，以便清洁整个反应孔的壁。一般来说，洗涤量越高，则孵育步骤残留的抗体或抗原量就越少。
洗涤次数:
影响洗涤效果的主要参数是洗涤循环的量。当然，洗涤次数越多，背景越低。然而，太多次的洗涤会降低信号强度，使其难以测定。通常的做法是在每次抗体或抗原孵育后重复洗涤三次。不过，一般而言，包被平板需要的洗涤次数比用户包被的平板要少。对于用户包被的ELISA板，必须优化洗涤次数。
控制洗涤量和洗涤次数的另一种方法是加入过量的洗涤液。一般来说，96孔板的每个孔能容纳330至460 µl。不过，有些自动化洗板机可设置程序，分配远远超出这个量的洗涤液，比如1 ml。它是如何做到的呢？其实很简单，就是在分液的同时打开吸液功能。换句话说，随着分液器分配更多的液体，抽吸器也将液体吸出。这种技术能增加洗涤量，但不会溢出到其他孔中。
抽 吸:
还有一些参数会影响洗涤步骤的效果。这些参数包括吸液高度和吸入位置，这两者都能调整，以降低背景（残留量）和差异。
残留液体中包含未结合的抗原或抗体，它们会增加背景信号。残留量越小，残留液体越少，转移到下一步的干扰液体也就越少。
吸液高度会明显影响残留量；如果洗涤吸头与反应孔底部的距离稍大，那就会让残留量急剧增加。反之，如果洗涤吸头压着反应孔底部，那么也会使吸液效率降低，残留量增加。
目前的洗板机一般使用两种类型的洗头：刚性和浮动。浮动洗头中的吸头可在洗涤过程中自由上下移动，而刚性洗头则固定在适当的位置。使用刚性洗头的洗涤操作在优化起来更为复杂，因为你需要非常仔细地调整吸液高度。如果你们实验室使用几种不同的板，那可能会很耗时。在使用浮动洗头时，吸头会降到反应孔的底部。调整高度就不是很重要，因此洗头会下降到底部。
抽吸的位置也对残留量有着重要影响；如果每个孔只使用一个抽吸点（这很常见，因为更快），那么抽吸的位置需要优化。最佳的位置取决于洗头的性状，但它几乎不在反应孔的中间，即使这是所有洗头最常见的默认位置。一般来说，最佳位置在孔中间与孔壁之间的某处。
反应孔的形状也会影响残留量。C形底（平底圆角）的微孔板一般会比那些平底尖角的微孔板残留量更低。
洗板注意：
1.需每天校正注液量及残液量，洗涤后残液量不得大于2 μl。
2.及时更换破损吸液针，避免破坏底板包被。
3.针对不同厂家酶标板注意调整吸液头下降高度，避免冲洗针头卡住酶标板。
4.注意调整洗液量，洗液量过多将溢出，过少将达不到洗涤效果。
5.关机前使用蒸馏水冲洗管道，避免洗液的结晶物堵塞管道。
6.不同种试剂盒的洗液严禁混合使用。
为了洗涤效果较好，实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法，在机器洗涤后再进行人工洗板1～2次，能达到理想的洗涤效果。
