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2024/11/27 9:44:03原理:葡萄球菌肠毒素属于超抗原,能够非特异性激活T细胞增殖并释放过量细胞因子,可用于抗肿瘤治疗。T细胞活化通过暴露于特定抗原(例如葡萄球菌肠毒素 B (SEB))来测定。SEB是一种细菌毒素,能够与抗原呈递细胞 (APC) 和 TCR上的MHCII类分子结合,诱导促炎细胞因子的释放,例如IL-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ。
应用举例:诱导活化T细胞
一、将 PBMCs(120 K/孔)与 Nuclight 绿色试剂标记的 Ramos 细胞(40 /孔)进行共培养。使用 CD3/CD28 Dynabead、CD3×CD19 BiTE 抗体或葡萄球菌肠毒素 B (SEB) 诱导活化。在 60 h 时,使用 T 细胞活化分析试剂盒、T 细胞介导的细胞杀伤分析试剂盒和 T 细胞耗竭分析试剂盒联合 iQue® 3 系统分析 10 µL 样本。
每种活化因子会导致不同的 CD3+ T 细胞蛋白表达和杀伤特征:
1.CD3/CD28 Dynabead 诱导的 T 细胞活化呈现浓度依赖的特性。最高的微球数量对应于最大的活化标志物表达百分比。该结果与高水平的细胞耗竭标志物呈现相关性。
2.与 Dynabead 和 SEB 相比,CD3×CD19 BiTE 抗体介导的靶细胞死亡增量最多,活化和耗竭水平显著降低。这说明 BiTE 介导的免疫细胞杀伤时间可能持续的较长。
3.SEB 刺激,即使在zui低浓度下,也可使 T 细胞活化并产生最大杀伤率,导致高水平的 T 细胞耗竭。
原理:葡萄球菌肠毒素属于超抗原,能够非特异性激活T细胞增殖并释放过量细胞因子,可用于抗肿瘤治疗。T细胞活化通过暴露于特定抗原(例如葡萄球菌肠毒素 B (SEB))来测定。SEB是一种细菌毒素,能够与抗原呈递细胞 (APC) 和 TCR上的MHCII类分子结合,诱导促炎细胞因子的释放,例如IL-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ。
二、使用来自 T 细胞活化分析试剂盒、T 细胞介导的细胞杀伤分析试剂盒和 T 细胞耗竭分析试剂盒的 Qbeads 测定 Nuclight 绿色标记的 Ramos 和 PBMC(3:1 比例)共培养时细胞因子的释放数据。在多个试剂盒中均检测了 IFNɣ 和 TNFa 的浓度,以便将所有试剂盒的测定结果取平均值。
各个活化因子对细胞因子分泌和对表面蛋白表达的影响相当:
1.在使用的微球数量范围内,CD3/CD28 Dynabead 诱导的细胞因子释放呈浓度依赖性增加。
2.与微球或 SEB 相比,CD3×CD19 BiTE 刺激后的细胞因子释放始终较低(最高刺激浓度下的颗粒酶 B 浓度除外)。该结果表明,在降低毒性风险的情况下(例如细胞因子释放综合征),可以实现高水平的细胞杀伤。
3.SEB 可诱导高水平的细胞因子释放(即使在低浓度下)。
三、将 PBMCs(25 K/孔)与贴壁 AU565 细胞(5 K/孔)进行共培养。使用 SEB 诱导 T 细胞活化。在 60 h 时,使用 T 细胞活化分析试剂盒、T 细胞介导的细胞杀伤和 T 细胞耗竭分析试剂盒联合 iQue® 3 系统提取靶细胞和效应细胞,进行终点分析。
SEB 活化诱导靶细胞杀伤呈浓度依赖性增加,伴随 CD3+ T 细胞上活化(CD69、CD25 和 HLA-DR)和耗竭(PD-1、LAG-3 和 TIM-3)标志物的高表达(在所有使用的 SEB 浓度中均是如此)。
其他应用:抗体制备、毒素检验、多种免疫和偶联试验、药物研发等。
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