上海通蔚实业有限公司
2012/5/21 15:41:04大鼠I型胶原上海，杭州
本试剂盒仅供研究使用 标本：细胞上清液
试 剂 组 成
精密度微孔板96孔 （Microtitration Strips） 1块 2～8℃干燥保存
酶标偶合液 （Conjugate ） 1瓶 12.0毫升 2～8℃冷藏保存
标准品 （Standard） 5瓶 各1.0毫升 2～8℃冷藏保存
呈色剂A （Substrate A） 1瓶 6.0毫升 2～8℃避光冷藏保存
呈色剂B （Substrate B） 1瓶 6.0毫升 2～8℃避光冷藏保存
终止液 （Stopping Solution） 1瓶 6.0毫升 室温保存
20倍浓缩洗涤液 （Rinsing Buffer x 20） 1瓶 60.0毫升 2～8℃冷藏保存
5倍浓缩样品稀释液 （Diluent x 5） 1瓶 15.0ml 2～8℃冷藏保存
英文说明书，中文说明书 各一份 室温保存
二、注意事项
1. 此试剂为体外检测试剂，效期内使用，试剂应视为传染物，不同总批号的试剂不能混用。
使用前应将盒内各试剂取出。室温放置至少30分钟，
浓缩洗涤液出现结晶后，请于37℃孵育15分钟。
浓缩样品稀释液出现结晶后，请于37℃孵育15分钟
若24小时内进行实验，标本可存放于2～8℃。不需及时实验，标本-20℃保存，避免反复冻融。
在反复清洗微孔板，并扣干微孔中的残余液体，否则将降低度，造成吸光度偏离的假像。
加样完毕后，应注意轻微摇动微孔反应条，以便使孔中的液体充分混匀。
试剂盒保存于2～8℃，请勿冷冻，有效期请见盒内标示。
大鼠I型胶原上海，杭州
三、实验前准备
1．使用前应将盒内各试剂取出，室温放置至少30分钟。
2．准备各种实验仪器及材料，如微量移液器，吸头，医用蒸馏水等
3．浓缩洗液与医用蒸馏水1︰19倍稀释后成为应用洗涤液
4．浓缩样品稀释液与医用蒸馏水1︰4倍稀释成应用样品稀释液
5．用应用样品稀释液来稀释样品，按照1：100的体积比来稀释样品如10μl的样品加入到1ml的应用样品稀释液中，充分混匀待用。）
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四、操 作 步 骤
1．取出酶标板，设空白孔，依照次序对应分别加入100μl的标准品于空白微孔中（空白孔视为0号标准品，用医用蒸馏水替代）
2、分别标记样品编号，加入100μl的稀释样品于空白微孔中（不同的样本采用不同的吸头）。
3、将酶标板置于37℃温育30分钟；
4、将酶标板板取出，将其中的液体甩去，每个孔中全部加满应用洗涤液后，立即甩去液体;
5、每个孔中加满应用洗涤液后，轻微振摇酶标板30秒后将孔中的应用洗涤液甩去，在吸水纸上将酶标板拍干。
6、重复第5个步骤5次，在吸水纸上将酶标板拍干。
7、在标准品孔和样品孔中加入100μl的酶标偶合溶液。
8、将96孔板置于37℃温育30分钟。
9、将酶标板取出，将其中的液体甩去，每个孔中全部加满应用洗涤液后，立即甩去液体。
10、每个孔中再次加满洗涤应用液后，室温轻微振摇酶标板30秒后将孔中的应用洗涤液甩去，在吸水纸上将酶标板拍干。
11、重复第5个步骤5次，在吸水纸上将酶标板拍干。
12、在每个孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。轻轻振荡混匀。（A液、B液采用不同的吸头加样）
13、将酶标板置于37℃避光温育反应15分钟。
14、每个微孔中加入50μl的终止液，轻轻振荡混匀。
15、在酶标仪上，450nm处测定OD; 显色后，15分钟内进行测定。
16、根据制备的标准曲线，计算样本含量
五、结 果 判 断
1. 仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值；
2、检测值范围：0－400ng/ml
3、敏感度：1.0ng/mlBisphenol A 双酚A [80-05-7] 250g
Bordeaux R 玫瑰桃红R [5858-33-3] 100g
Bradford reagent, solution Bradford 蛋白质定量试剂，溶液 / 100ml
Bradford reagent, solution Bradford 蛋白质定量试剂，溶液 / 100ml
Bisphenol A 双酚A [80-05-7] 1kg
Bismuth（III） subsalicylate 水杨酸铋 [14882-18-9] 100g
Bis-Tris 双（2-羟乙基）氨基（三羟甲基）甲烷 [6976-37-0] 25g
Bis-Tris 双（2-羟乙基）氨基（三羟甲基）甲烷 [6976-37-0] 100g
