使用前准备：从冷藏箱中取出 BT21 生物指示剂，在室温下放置一小时，使其恢复至室温条件。
放置指示剂：将 BT21 安瓿瓶生物指示剂放到一个含有液体的容器内灭菌，或者是装有液体的相似容器里。这些要灭菌的容器应该型号相同，装有的液体量相同。
进行灭菌操作：按标准流程进行灭菌。
灭菌后取出：灭菌过程完成后，打开灭菌室的门，等五分钟然后将生物指示剂从容器中取出。需带上防护眼镜和手套，防止可能出现的意外破裂或污染。
培养与结果判定：在 55℃-62℃的环境下培养安瓿瓶，时长不超过 48 小时，每次要用一支没有灭过菌的同批次生物指示剂，在相同条件下培养作为阳性对照 。每 10 小时观察一次，如果生长指示培养液的颜色变黄说明这次灭菌过程失败，如果 48 小时后，指示剂内溶液没有颜色变化，证明结果呈阴性，即灭菌过程是可接受的，同时阳性对照的生物指示剂应显示黄色 。
