摘要：本文介绍了分别使用 Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统 (LC-MS/MS) 和 1200 LC-DAD检测蚝油和豆瓣酱中 7 种对羟基苯甲酸酯的分析方法，采用两种检测器可满足不同检测限和定量限的要求。色谱柱使用 Agilent Poroshell 120 EC-C18，实现了 7 种对羟基苯甲酸酯的良好分离，前处理使用 Agilent Bond Elut QuEChERS 分散 SPE 试剂盒对蚝油和豆瓣酱基质进行净化，过程简便、快速。分别采用 LC-MS/MS 和 LC-DAD 进行检测时，方法检测限分别为 5 μg/kg 和 0.5 mg/kg，定量限分别为 10 μg/kg 和 1 mg/kg。在相应的浓度范围内各分析物的线性相关系数均大于 0.99。在蚝油和豆瓣酱中相应加标浓度下，7 种对羟基苯甲酸酯的平均加标回收率和相对标准偏差分别为 70.1%–105.8% 和1.5%–14.7%，准确度和精密度良好，可用于豆瓣酱和蚝油等调味品中对羟基苯甲酸酯类的分析检测。
前言对羟基苯甲酸酯类化合物是具有防腐作用的添加剂，可有效防止霉菌、酵母菌和细菌的生长。由于不同的酯抑制细菌的能力有所不同，因此在烘焙食品、调味品、果汁和果冻等食品中常用由不同酯类组成的复配型防腐剂。在我国，GB 2760-2014[1] 规定，对羟基苯甲酸酯类及其钠盐在调味品（如酱油、醋、蚝油等）中的最大使用量为 0.25 g/kg（以对羟基苯甲酸计），而有些国家/地区（如马来西亚）则禁止使用，因此针对不同国家/地区的规定有必要建立满足不同检测限要求的分析方法。关于食品中对羟基苯甲酸酯类化合物的检测，GB/T 5009.31-2016[2]规定使用配备 FID 的气相色谱系统进行检测。该方法需要首先将样品中的对羟基苯甲酸酯用盐酸酸化；并用乙mi多次重复提取，用饱和氯化钠溶液和碳酸氢钠溶液多次洗涤；浓缩近干后，用乙醇复溶；然后进样分析。样品前处理过程复杂、耗时，且溶剂消耗量大。SN/T 4047-2014[3] 规定的样品前处理方法则是：用乙腈多次提取，氮吹后用 35% 甲醇水定容；然后经 LC-C18 固相萃取柱净化，再次氮吹后用甲醇定容。该方法氮吹步骤多，同样存在耗时较长的弊端。
本应用选择 7 种对羟基苯甲酸酯类防腐剂（结构和 LogP 值见图 1）作为目标化合物，以两种比较复杂的典型调味品（即蚝油和豆瓣酱）为研究基质，使用 Agilent Bond Elut QuEChERS 分散SPE 进行净化，并分别采用高灵敏度 Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统 (LC/MS/MS) 和 1200 LC-DAD 进行检测，该方法样品前处理过程简单、快速和高效，可适用不同的检测需求。
实验部分试剂和样品实验用乙腈、甲醇均为色谱纯，购于北京迪马科技有限公司；实验用水为娃哈哈纯净水。7 种对羟基苯甲酸酯标准品 (BePure) 购于曼哈格公司，浓度均为1000 µg/mL 且以甲醇为溶剂。蚝油 和豆瓣酱样品为市售产品。标准品制备分别取适量对羟基苯甲酸酯标准品，用乙腈配制成浓度为100 μg/mL 的混合标准工作液，逐级稀释后备用。校准标准工作液的配制：准确移取适量的上述标准工作液，用乙腈稀释，分别得到浓度为 1、5、10、50、 100、200 和 500 ng/mL的校准标准工作液和浓度为 0.2、0.5、1、2、5、10、50 和100 μg/mL 的校准标准工作液，分别进 LC-MS/MS 和 LC-DAD 检测。临用现配。
样品前处理称取 5 g（精确至 0.01 g）样品于 50 mL 聚丙烯离心管中，加入陶瓷均质子；然后加入 5 mL 水和 10 mL 乙腈，涡旋振荡 5 min；加入 Bond Elut QuEChERS EN 萃取试剂盒（部件号 5982-5650），涡旋振荡 2 min，再以 8000 r/min 离心 5 min；取 6 mL 上清液，加入 Bond Elut QuEChERS 分散 SPE 试剂盒（部件号5982-5158）中，涡旋振荡 2 min，再以 8000 r/min 离心 5 min；过 0.2 μm 尼龙微孔滤膜，待测。
MS 条件仪器配置： Agilent 6470 三重四极杆质谱仪（部件号 G6470B）离子源模式： ESI (-)干燥气温度： 250 °C干燥气流速： 7 L/min鞘气温度： 350 °C鞘气流速： 12 L/min雾化器压力： 40 psi毛细管电压： 3000 V（负）扫描模式 ： MRM（具体参数见下表 1）
结论本应用使用 Poroshell 120 EC-C18 色谱柱实现了 7 种对羟基苯甲酸酯的分离，并分别采用 Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统 (LC-MS/MS) 和 LC-DAD 进行检测，建立了可适用于不同检测限和定量限要求的方法。使用 Agilent Bond Elut QuEChERS 分散SPE 试剂盒对蚝油和豆瓣酱基质实现了高效的净化，比现行标准方法中的样品前处理过程更加简便、快速。使用 LC-MS/MS 进行检测时，在 1–500 ng/mL 的浓度范围内各目标分析物的相关系数均大于 0.99；方法检测限为 5 μg/kg，定量限为 10 μg/kg，在蚝油和豆瓣酱中加标浓度为 10–50 μg/kg 时，7 种对羟基苯甲酸酯的平均加标回收率和相对标准偏差分别为 70.1%–105.8% 和1.5%–14.7%，表现出良好的准确度和精密度。使用 LC-DAD 检测时，在 0.2–100 μg/mL 的浓度范围内各目标分析物的相关系数均大于 0.99；方法检测限为 0.5 mg/kg，定量限为 1 mg/kg，在蚝油和豆瓣酱中加标浓度为 1–10 mg/kg 时，7 种对羟基苯甲酸酯的平均加标回收率和相对标准偏差分别为 74.7%–100.6% 和1.0%–3.9%，同样表现出良好的准确度和精密度。两种检测方法均适用于调味品蚝油和豆瓣酱中对羟基苯甲酸酯的定量分析。
