对于液相色谱工作者来说，想要保证液相色谱实验的顺利进行，除了确保手上有一支合适的色谱柱之外，选择和配置好实验流动相也是成败的关键因素。通常，用于反相 LC 的流动相可以是纯溶剂、混合溶剂或含有缓冲液和添加剂的溶剂。而实际的流动相配置中有数百种溶剂可供选择，因此配置出符合需求的流动相变得具有挑战性。本期，我们将从流动相的溶剂特性、缓冲液和添加剂选择以及色谱技术对流动相的需求趋势展开介绍。
流动相溶剂特性
流动相的一些特性可以帮助我们为反相分析选择正确的流动相组成。这些特性包括：
溶剂纯度——在 LC 中选择作为流动相的溶剂应为 色谱纯度或质谱级纯度，应进行过滤和超声处理，以确保 UV 光谱中的吸光度最小且不含气泡。
溶剂粘度——反相流动相应为最佳粘度，以帮助确保通过HPLC 柱固定相的最佳线速度，从而提供更窄和更尖锐的峰，因而提高分析的整体灵敏度。
折光率——这是使用示差折光检测器时的一个关键考虑因素。理想情况下，当使用示差检测器时，流动相和样品溶剂应具有相似的折射率以避免出现负峰，换句话说，样品应在流动相中制备。
溶剂沸点——最好选择沸点低的溶剂以提高回收率，特别是在LC-MS 中，挥发性更强的溶剂将改善离子化，从而提高MS 灵敏度。
无腐蚀性——流动相溶剂不得腐蚀流路中的 HPLC 管、泵阀、密封件和其他部件。
溶剂毒性——确保溶剂无毒并且应使用稳定状态下的溶剂。
溶剂混溶性——选择与样品混溶的溶剂。分析物也必须可溶。否则，在色谱柱入口筛板处将产生样品沉淀，从而引发高背压、基线问题、导致分析物峰灵敏度较低以及色谱图中峰面积和峰形问题。
流动相透光度——选择一种在检测波长下可以透射的流动相。
洗脱强度——这是溶剂从固定相中洗脱目标分析物的能力。洗脱强度越高，溶剂越有效，选择性越好。流动相溶剂应具有最佳和足够的洗脱强度，以实现对目标分析物的选择性。
考虑到这些特性，大多数色谱工作者的流动相溶剂是乙腈，因为它具有最佳粘度、良好的 UV 吸光度和足够的洗脱强度。
其他常见的溶剂包括甲醇，甲醇的粘度比乙腈高（特别是与水混合时），还有四氢呋喃，它具有高洗脱强度，但因为毒性更大从而存在安全问题。甲基叔丁基醚可作为四氢呋喃的替代品。
选择流动相缓冲液和添加剂
除了选择流动相溶剂外，还需要选择合适的缓冲液和/或其他添加剂。缓冲液用于控制流动相的 pH 值。酸性添加剂（pH 为 2 至 4）用于大多数制药应用，而碱性流动相（pH 大于 8）用于为碱性分析物实现更高的保留和改善的峰形。
简化的流动相，实验最佳的选择
为反相 LC 选择更简单的流动相已成为常态。这背后的实用性显而易见，随着色谱柱固定相和色谱柱制造技术的进步以及高灵敏度、高分辨率仪器的可及性，减少了对缓冲液和其他添加剂的需求，而这些需求在以前是得到良好色谱所必需的条件。
例如，传统上将乙腈与 95% 的水混合以通过确保两种流动相在粘度和表面张力方面相似度来提高混合效率。然而，随着泵的改进和在线混合器的引入，这种需求变得不再必要。
除此之外，随着使用具有线性梯度分布的更简单的溶剂，方法变得更加稳健，并且随着高分辨率质谱技术的快速发展，进一步减少了 LC 方法中对复杂流动相的需求。
