荧光定量PCR仪的核心在于利用荧光信号来实时监测PCR过程中DNA或RNA样本的扩增情况,从而实现对目标基因的精确定量分析。在荧光定量PCR中,首先需要将待测样本与特异性引物、DNA聚合酶以及荧光基团或荧光标记的探针混合,形成一个反应体系。然后,通过设定特定的PCR程序,如退火温度、延伸时间等,使得DNA片段在PCR仪中进行扩增。在PCR反应过程中,每当一个DNA片段被扩增时,与之结合的荧光基团或探针就会发出荧光信号。荧光定量PCR仪通过高灵敏度的荧光检测系统,实时收集并分析这些荧光信号,将其转化为数字信号,从而精确地反映出PCR产物的生成量。
一、操作步骤
打开电脑和荧光定量PCR仪的软件,设置PCR仪各通道的光电倍增器(PMT)电压。
将需要扩增的样品模板、引物、探针和内参照荧光探针分别加入到样品孔和试剂孔中。
加入PCR扩增试剂,包括缓冲液、引物、探针和内参照荧光探针。
启动PCR扩增仪,设定循环参数,包括预变性、变性、复性、延伸和荧光检测条件。
在每个循环中,加入相应的预变性液、复性液、延伸液和检测液,并维持一定的时间。
每次循环结束后,PCR仪自动收集信号并进行数据分析。
经过多次循环后,PCR仪将自动停止运行并输出结果。
二、维护保养
仪器外表应定期用软布加少数清水擦洗,清洗后将仪器擦干。若有试剂泄漏在仪器外表,应使用软布加70%酒精擦洗洁净。
反应孔应定期清洁,一般3个月一次,可用吹气球轻轻吹拭。为了防止尘土进入反应孔,仪器不使用时,应关闭滑盖。若有试剂进入样本孔内,应使用无尘软布加70%酒精擦洗洁净。
不要频频开关仪器,两次开关间隔时间不得低于30秒。试验结束后不要当即关闭电源,应待机10分钟后再关闭电源。
应使用原厂商供应的电源线和通讯线,禁止在仪器上进行沸水浴或低温保温(如4℃)。
仪器装有两个10A保险丝,用以保护仪器。当保险丝发生损坏后,用户应按说明书中的方法替换保险丝。