PVDF膜（聚偏氟乙烯膜）在Western Blot实验中广泛应用于蛋白质转印，但其本质是一种具有疏水性的聚合物，需要在使用前进行预处理活化，使其在水性缓冲液中更易使用。PVDF膜具有不同的孔径大小，这些不同之处会影响其在过滤和分离应用中的性能和适用性。
PVDF孔径大小不同
• 0.22μm的PVDF膜适用于截留较小的分子，如小于20kD的蛋白质分子。这种膜的孔径较小，能够有效地过滤掉较小的颗粒物和细菌。
• 0.45μm的PVDF膜则适用于较大分子的蛋白和核酸，以及大于20kD的蛋白质。这种膜的孔径较大，更适合于需要保留较大颗粒的场合。
PVDF操作压力与通量不同
• 0.22μm的膜孔径较小，通常需要更高的操作压力来维持相同的通量，这可能导致较高的操作阻力。
• 0.45μm的膜孔径较大，允许更大的通量，通常需要较低的操作压力，因此具有较低的操作阻力。
PVDF蛋白质转移与分辨率不同
• 0.22μm的膜因其较小的孔径和较高的结合能力，特别适用于分子量小于20kDa的蛋白质转移。拥有更高转移的分辨率，适用于检测蛋白质大小相近的多个条带或进行精细的蛋白质定量分析。
• 0.45μm的膜则更适合分子量大于20kDa的蛋白质转移。较大的孔径减少了膜上的堵塞，分辨率相对较低，但在转移大分子量蛋白质时可能更为有效。
PVDF应用范围不同
• 0.22μm PVDF膜适用于高度微生物阻隔的应用，如医疗行业、生物制药、实验室和饮用水处理等。
• 0.45μm PVDF膜适用于颗粒去除、预过滤和一些微生物过滤应用，如食品和饮料加工、废水处理以及实验室预过滤等。
PVDF膜使用注意事项
✔ 甲醇激活
使用前用甲醇浸泡。甲醇能够使PVDF膜的表面活化，增加膜的疏水性，从而提高其对蛋白质的结合能力。
✔ 避免干燥
激活膜后、转膜过程中以及转膜结束后，都要快速在液体间转移膜，避免膜在空气中干燥，影响后续曝光。
✔ 避免直接接触
应避免直接用手接触膜表面，以防止油脂和蛋白质污染，影响转膜效率并产生背景污斑。全程应使用镊子操作膜，以减少污染和物理损伤。
✔ 排尽气泡
在进行电转印时，需要确保凝胶和PVDF膜之间没有气泡，因为气泡会影响蛋白质的均匀转移。
