液相色谱仪的使用教程
液相色谱仪的使用教程详细步骤如下:
一、开机前准备
1.流动相准备:
根据实验需求选择合适的流动相,如甲醇、乙腈、水等,以及相应的添加剂(如缓冲盐等)。
使用合适的滤膜(有机系或水系,常用孔径为0.20μm或0.45μm)对流动相进行过滤,以去除杂质。
对过滤后的流动相进行超声脱气10~20分钟,去除溶解在其中的气体,防止在仪器中形成气泡影响分析结果。
2.样品准备:
确保样品溶解均匀且无杂质。如果样品是固体,需要将其溶解在合适的溶剂中;如果样品是液体,需要进行适当的稀释或前处理。
3.色谱柱选择:
根据样品的性质和分析目的选择合适的色谱柱。例如,对于极性较大的样品,可选择反相色谱柱(如C18柱);对于极性较小的样品,正相色谱柱可能更合适。
注意色谱柱的规格(如长度、内径、粒径等)对分离效果的影响。
二、开机
1.打开硬件设备:先打开计算机,进入操作系统后,再打开液相色谱仪的各个模块电源,如泵、检测器、柱温箱等。
2.打开软件:双击液相色谱仪的工作站软件图标,进入软件操作界面。
三、系统初始化和平衡
1.冲洗系统:
在仪器操作界面中设置泵的参数,用甲醇或其他合适的溶剂作为初始流动相,以一定的流速冲洗整个液相色谱系统,包括泵、管路、进样阀、色谱柱和检测器等。
冲洗时间一般为20~30分钟,目的是去除系统中的杂质和残留物质,同时检查系统是否存在漏液等问题。
2.设置柱温:
根据实验要求,在柱温箱上设置合适的温度,使色谱柱达到稳定的工作温度。
柱温的设置需要考虑色谱柱的类型、样品的性质以及分析方法的要求。
3.基线稳定:
在冲洗过程中,观察检测器的信号,等待基线稳定。基线稳定的标准通常是基线的波动在一定范围内,且在一段时间内保持相对稳定。
这可能需要30分钟或更长时间,具体取决于仪器的状态和分析方法。
四、方法设置
1.泵参数设置:设置流动相的流速、比例等参数。如果是梯度洗脱,还需要设置梯度程序,即不同时间点流动相的组成变化。
2.检测器参数设置:设置检测波长、带宽、响应时间等参数。根据样品的特性和分析目的选择合适的检测波长,以获得检测效果。
3.其他参数设置:根据实验需求,还可以设置其他相关参数,如柱温箱的温度控制程序、数据采集的频率等。
五、进样分析
1.进样前准备:
如果是自动进样器,将样品瓶放入自动进样器的样品架上,并在软件中设置好样品信息。
如果是手动进样器,用洗针液洗净进样针,再用样品溶液润洗进样针3遍以上,并排除针筒中的气泡。
2.进样操作:
对于自动进样器,在软件中点击开始进样按钮,自动进样器会按照设定的程序进行进样。
对于手动进样器,将进样针插入进样阀的进样口,缓慢注入样品溶液,然后切换进样阀的位置,启动进样程序。
进样完成后,记录样品的名称、进样时间等信息。
六、数据处理和分析
1.数据采集:在进样后,液相色谱仪会自动采集样品的色谱数据,并将其传输到计算机上的工作站软件中。
2.数据处理:对采集到的数据进行处理,包括积分、峰识别、峰面积计算、保留时间确定等。可以根据需要设置积分参数、峰的判定标准等,以获得准确的分析结果。
3.数据分析:根据处理后的数据,对样品的组成、含量、纯度等进行分析和判断。可以通过比较样品的色谱图与标准品的色谱图,或者使用标准曲线法等方法进行定量分析。
七、实验结束后的处理
1.样品处理:取出样品瓶,将剩余的样品进行妥善处理,如回收、废弃等。
2.系统清洗:
用适当的溶剂(如甲醇、水等)冲洗液相色谱系统,特别是泵、进样阀和色谱柱等部件,以去除残留的样品和流动相。
清洗时间一般为30分钟以上,确保系统清洗干净。如果使用过含盐缓冲液,则必须先用清水冲洗泵15分钟,再冲洗干净系统内其他含盐的部位,最后用纯的强溶剂冲洗整个系统以保护色谱柱。
八、关机
1.先关闭液相色谱仪的软件。
2.依次关闭检测器、泵、柱温箱等模块的电源。
3.关闭计算机。
请注意,不同型号的液相色谱仪可能在操作细节上存在差异,因此在实际使用时,建议参考具体仪器的说明书或咨询仪器供应商以获取准确的操作指导。
免责声明
- 凡本网注明“来源:化工仪器网”的所有作品,均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-化工仪器网合法拥有版权或有权使用的作品,未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的,应在授权范围内使用,并注明“来源:化工仪器网”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。
- 本网转载并注明自其他来源(非化工仪器网)的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品第一来源,并自负版权等法律责任。
- 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。