关于生物实验当中的标准曲线常见问题及解答！-化工仪器网-手机版

百欧博伟生物：标准曲线的制作中，会有这样那样的问题，比如常有人问：一定要做5个点？线性相关系数R值必须几个9才达标？标曲是每天都做还是每次都做？标曲是否必须通过原点？……

1、标准曲线的制作依据？

GB/T22554-2010《基于标准样品的线性校准》中：

1)标准曲线的浓度范围应覆盖正常操作条件下的被测量范围;

2)标准样品的组分尽量与被测样品组分一致;

3)标准样品的浓度值应等距离的分布在被测量范围;

4)标准样品的个数至少应有3个浓度;

5)每个标准点至少重复2次，这个重复是指从稀释开始;如果国家标准有相应的浓度系列推荐，尽量按国家标准。工作中我们经常采用线性校准，因为线性方程简洁。

2、什么是校准曲线？

校准曲线包括标准曲线和工作曲线，前者用标准溶液系列直接测量，没有经过预处理过程，这对于样品往往造成较大误差;而后者所使用的标准溶液经过了与样品相同的消解、净化、测量等全过程。

3、首先标曲要做几个点？

3个点：对于一些低浓度，特别是微量分析，并且浓度范围不是很大的，检测器响应可靠，背景干扰非常小的，则可以选用较少的工作点就行，一般有3个浓度点就足够了，有些甚至可以只用一个浓度点就行，另一个点直接用坐标原点。

4~6个点：对于平时测量的样品浓度范围较宽，并且检测器响应不是一次曲线（直线）的，可以采用二次曲线或分段校正方式，以减少数据偏差，这种情况就需要多用几个数据点，如果不分段，数据点有4~6个就够用。

4、标曲R值是几个9才合格？

实验室应按检测标准(方法)的要求使用标准溶液或标准物质建立标准曲线。所用标准溶液或标准物质应覆盖被测样品的浓度范围。检测标准(方法)如无具体的要求，至少使用5个标样(除空白外)建立线性标准曲线，每个点重复测定1-3次，对于筛选方法，线性回归方程的相关系数不应低于0.98，对于确证方法，相关系数不应低于0.99。其实，大于0.99是判断是否为线性相关的一个标准，实际应用中线性大于0.999才是比较理想的。线性在0.99到0.999之间的监测结果只用接近浓度一半(中间浓度)的位置才比较准确，如果线性大于0.999的话，在整个线性范围内都会有一个比较满意的结果。

如果检测的线性不好，可以减少标准的覆盖范围，将标准的浓度调整到待测样品浓度附近，这样结果也是非常准确的。

5、标准曲线有效期的规定？

(1)标准曲线属于实验室质量控制的范围，按照《实验室资质认定评审准则》中结果控制的要求：

定期使用有证标准物质(参考物质)进行监控和/或使用次级标准物质(参考物质)开展内部质量控制。

(2)准则中并未对“定期”进行规定，所以如果“定期”，就根据实验室的实际情况来定了。

(3)既然准则上没说明，那根据一般的分析教材，当实验条件(包括药剂、人员、仪器等)发生变化时，重新制作标准曲线。一般来说仪器如果长期使用，并经过检定，是处于稳定状态，而人员药剂的变化往往会较大。如果说每次换个人操作都要换曲线，那工作量就太大了。

6、每次开机都必须做标准曲线？

从药品检测的要求来说，因为：

（1）每天所配的流动相都会有所不同，导致出峰的时间都会有一定的差异，峰面积相应都有所差异。

（2）检测器光能也在不断的衰弱，因此其每天的相应值也有所不同，其峰面积也有差异。基于以上原因，原则上应该是每天都要进行标准曲线校正的。标准曲线不要每次都做，但是每次必须进标准品样品;因为每次你的流动相和原来的不可能一样，同时仪器的状态也在变化，所以不同批次间的保留时间是不一致的，所以你必须用随行标准品来定位与定量。

7、校准曲线能不能长期使用？

不能长期使用，可以短期使用，使用前做一个单点重校，测试一个零点和中间点，测出一个纠正过的曲线。

8、标准曲线是否必须过原点？

看要求，如果零点的有效值是小数点后面第四位才有数字不影响测试，超过0.001就不行了。

9、标准曲线的线性范围？

点一定要大于被测试样品(物质)10%。

10、相关系数的有效数字？

至少二位以上。

11、Y=bX和二次曲线的选用？

看标准要求，以国标或行业标准为依据。测试范围窄的建议使用一次线性方程，测试范围宽点使用非线性或二次方程。

12、校准曲线的斜率、截距保留几位有效数字？

（1）参考依据，参考标准HJ 630,其他行业参考使用。