德国Minerva Biolabs公司提供的PCR Clean™是针对实验室常用的核酸污染祛除试剂，对比其湿巾和喷雾剂在常见的仪器、物品的污染祛除效果进行了检测，并对其结果进行了详细的阐释。
科研人员测试了PCR Clean™和PCR Clean™Wipes对玻璃表面dna酶的祛除能力。简而言之，DNase I(1µl, 3u /µl, Applichem, Cat.；将No.A3778.0010)移液到玻璃表面风干。接下来，用干纸巾、70%异丙醇浸泡液、PCR Clean™浸泡液或PCR Clean™ Wipes擦拭。
使用基因组DNA （gDNA）标准物作为底物/指示剂，通过qPCR间接测量DNA酶的酶活性来鉴定持续的DNA酶污染。
简单地说，在擦拭步骤后，将20µl gDNA （M.gallisepticum，10^3个基因组拷贝/µl， 10mM MgCl2在PCR级水中）添加到DNA预包被的点上。
然后通过上下移液10次收集污染的DNase及其底物gDNA的混合物，并在37°C下孵育15分钟，以允许酶促反应（消化）发生。
然后通过评估microstart®ATMP支原体（Sartorius STEDIM Biotech） qPCR扩增的性能来推断由于污染DNA酶引起的相关DNA降解。作为qPCR反应wan quan受损的参考，科研人员纳入阳性对照，采用20µl的gDNA（10^3个基因组拷贝/µl）在37℃下孵育15分钟，获得阳性对照。同样的程序用于产生阴性对照，不添加DNase I。
实验结果，在用不同方法进行去污后，通过在DNase污染点上添加gDNA（鸡毒支原体，103 C/µl）的qPCR来评估DNase（3 U）的有效祛除率。
在qPCR之前，从污染的玻璃表面收集gDNA和DNase的混合物，并在酶反应的**条件下孵育。当没有观察到qPCR反应受影响时，认为净化完成。这是通过用PCR Clean™湿巾或PCR Clean浸湿的纸巾擦拭来实现的，正如成功扩增掺入的gDNA所证明的那样。
从PCR Clean™湿巾或PCR Clean浸湿纸巾处理过的表面样本中，获得的掺入gDNA的Ct值与阴性对照相当，在gDNA掺入之前没有吸过DNase（表5）。
省略擦拭步骤，使用干燥的纸巾或用70%异丙醇润湿的毛巾，通过之前添加的DNase诱导gDNA大量降解（无Ct，表5）。在阳性对照组中观察到类似的wan quan降解，在**反应条件下允许DNases诱导的DNA降解发生。图5显示了阈值以上的清晰扩增曲线，仅适用于经PCR Clean™处理的表面和阴性对照，从而证实了qPCR性能因所用祛除剂而异。
表5.使用随后的DNA回收作为去污效率的指标，在表面清洁后残留的DNA酶活性。该表显示了与对照组相比，掺入DNase预涂玻璃表面的gDNA的qPCR Ct值，后来用几种方法擦拭。通过**酶消化（阳性对照）获得的扩增缺失（无Ct）表明DNA明显依赖于DNA酶降解，阻碍了qPCR。同样，低效的净化方法也会导致qPCR受损。斑点靶标的成功扩增（在阴性对照的2 Ct值内）表明，之前污染的DNase被显著祛除。
图5.在应用了几种清洁方法后，在DNase污染的玻璃表面上添加gDNA的qPCR扩增曲线与对照条件进行了比较（详见下文图例）。
