钙黄绿素 AM 是一种能渗透细胞的染料，可用于测定大多数真核细胞的活力。 在活细胞中，细胞内的酯酶水解乙酰氧甲酯之后，非荧光的钙黄绿素 AM 转化为绿色荧光钙黄绿素。
艾美捷超级纯钙黄绿素,AM：
货号：AAT-22003
等级：超纯
分子量：994.86
溶剂：DMSO（二甲基亚砜）
消光系数（cm -1 M -1）：81000
激发（纳米）：501
发射（纳米）：521
H-短语：H303, H313, H333
危险符号：XN
预期用途：仅限研究使用（RUO）
R-短语：R20, R21, R22
储存：冷冻（< -15 °C）；尽量减少光照暴露
激发：488 纳米激光
发射：530, 30 纳米滤光片
仪器规格(S)：FITC通道
激发：490
发射：525
截止：515
推荐板：黑色壁，透明底
仪器规格(S)：底部读取模式
激发和发射
Calcein-AM是一种非荧光化合物，分子量为994.86道尔顿。它被非特异性的细胞内酯酶水解成calcein。Calcein是一种荧光化合物，激发峰值为501纳米，发射峰值为521纳米。在流式细胞仪中，可以用488纳米激光激发并在FITC通道读取。在荧光板读数器中，可以使用Ex/Em = 490/525纳米的设置，并在515纳米处设置截止滤光片。
毒性
Calcein AM的安全数据表指出，它是一种非危险化学品或混合物。在生命科学和药物发现研究中，由于其相对较低的细胞毒性，calcein AM通常用于研究酶活性、细胞活力、膜完整性和长期细胞追踪。然而，对于特定的细胞系和实验条件，高浓度的calcein AM显示出对细胞的毒性。
Calcein AM能否固定？
简单地说，不，calcein AM是不可固定的。无论使用何种固定方法——醛类或甲醇固定——用calcein AM染色的细胞都会失去它们的染色模式。此外，calcein AM不能用于固定细胞，因为它们缺乏将calcein AM转化为calcein所需的酯酶和保留染料所需的膜完整性。Calcein AM是一种荧光原酯酶底物，只能用于活细胞以确定细胞活力。
Calcein AM能染色细菌吗？
Calcein AM染色不仅适用于真核样本，还可用于确定细菌样本的细胞活力。Calcein AM适用于检测许多活的革兰氏阴性细菌菌株，可用于微生物学研究、环境监测、药品无菌性测试和食品及植物评估技术。与真核细胞一样，细菌在其细胞质中含有微生物酯酶，可以裂解calcein AM的疏水阻断基团，并将它们转化为荧光的calcein。信号可以使用荧光仪器测量，其强度与存在的活细菌数量成正比。
如何配制calcein溶液？
Calcein及其衍生物calcein AM通常作为冻干固体供应，必须在加载到细胞之前在溶液中重悬，通常是DMSO。要配制calcein或calcein AM的库存溶液，请在高质量的无水DMSO中重悬染料，使浓度大约为1毫克/毫升。例如，向50微克的calcein AM中加入50微升的DMSO将得到1毫克/毫升的库存溶液。
对于calcein AM，需要将库存溶液进一步稀释到水性缓冲液中（例如，HBSS），然后才能加载到细胞中。作为水性溶液，calcein AM容易水解，应在一天内使用。
什么是calcein AM的阳性和阴性对照？
阳性对照：这是一群在正常培养环境中生长的健康、未经处理的细胞。健康、未经处理的细胞含有水解calcein AM成荧光产物的细胞内酯酶和保留染料的完整质膜。用calcein AM染色阳性对照将导致细胞在蓝光激发下发出绿色荧光。
阴性对照：这是一群死亡细胞，通常用乙醇或甲醛固定。死亡细胞不含有细胞内酯酶，因此无法将非荧光的calcein AM底物转化为荧光的calcein产物。用calcein AM染色的阴性对照不会产生荧光信号。
在进行calcein AM细胞活力测定时，执行目标样本时，拥有适当的阳性和阴性对照非常重要，以便跟踪报告结果的变化和相似性。所有对照应来自与目标样本相同的培养。
Calcein AM能染色死亡或坏死的细胞吗？
不，calcein AM不染色死亡或坏死的细胞，因为它们缺乏将非荧光的calcein AM转化为荧光calcein所需的酶（例如，非特异性细胞内酯酶）。
Calcein AM染色协议
简要总结
准备库存溶液（2至5毫摩尔）
准备工作溶液（1至10微摩尔）
准备细胞成像
去除细胞培养基并洗涤细胞
将工作溶液加入培养中
在37°C下孵化（30至60分钟）
替换工作溶液以去除多余的探针
