脂肪肝，也称为脂肪性肝病，是一种以细胞内脂质异常积累为特征的病理过程。虽然单纯的脂肪肝可能与肝功能的显著损害无关，但过多的脂肪积累可能导致肝硬化甚至肝衰竭。非酒精性脂肪肝的分子机制尚不清楚，关于脂质积累后导致肝细胞损伤进展的途径（s）的信息也很少。确定肝毒性是药物发现过程中的一个重要组成部分，其中包括脂肪肝作为评估的关键参数之一。Cayman的脂肪肝比色测定试剂盒提供了一个方便的工具，用于评估药物候选物的脂肪肝风险。在这个测定中，使用油红O染色肝细胞中的中性脂质。然后，在染料从脂滴中提取后，使用板读数器对脂质积累进行定量。试剂盒中包含氯喹作为阳性对照。
需要但未提供的：请下载试剂盒手册，以验证是否需要超纯水（Milli-Q或等效物）或该测定的其他任何组分。
警告：本品不适用于人类或兽医用途。
艾美捷Cayman的脂肪变性比色分析试剂盒（#10012643-1），用于评估使用油红O染色肝细胞中性脂质的候选药物的乳糖病风险。从脂滴中提取液后，可以使用平板读数器定量脂质积聚。试剂盒中包含氯喹作为阳性对照，用于筛选诱导肝细胞脂肪变性的候选药物。
脂肪变性比色分析试剂盒测定方案：
板配置
在板孔的使用上没有特定的模式。可以使用12孔、24孔或96孔板。一个典型的实验板将包括没有细胞的孔和用实验化合物或载体处理的细胞孔。我们建议每个处理进行三次重复。我们建议您在提供的模板表上记录每个孔的内容。
细胞处理：
以下方案是为96孔板设计的。对于其他板型，应相应调整每个孔施加的培养基/溶液体积。
1. 在96孔板中每孔播种10⁴个细胞。培养细胞过夜。
2. 第二天，用实验化合物或载体处理细胞72小时，或根据您的典型实验方案使用的时间。氯喹，一种已知能诱导脂肪肝的化合物，作为试剂盒中的阳性对照。推荐的浓度是25μM。在这个浓度下，经过72小时的处理后，应该可以观察到脂滴积累的显著诱导。
3. 结束实验，并使用下面描述的脂滴染色程序检查实验化合物对脂肪肝的影响。
细胞内脂滴的分布
下图展示了使用本试剂盒在肝细胞中观察到的脂质积累的典型染色示例。您的结果可能会根据所接种的细胞数量和脂质积累的程度而有所不同。
图：氯喹对HepG2细胞脂滴积累的影响。HepG2细胞以每孔10⁴个细胞的密度在96孔板中接种，并在37°C孵化器中过夜培养。第二天，细胞用载体或不同剂量的氯喹处理三天。A组：用载体处理的HepG2细胞。细胞中有一些脂滴，表现为红色点状。B组：用25μM氯喹处理的HepG2细胞显示出脂滴的显著积累，这通过油红O染色观察到的大量红色点状明显可见。
脂肪变性比色分析试剂盒文献参考：
1.Burt,AD.Steatosis and steatohepatitis.Current Diagnostic Pathology 7,141-147(2001).
2.Donohue,T.M,r.Alcohol-induced steatosisin liver cells.World JGastroenterol.13(37),4974-4978(2007).
3.Adams,LA,Angulo,P,and Lindor,KD.Nonalcoholic fatty liver disease.CMAJ 172(7),899-905(2005).
4.Non-clinical guideline on drug-induced hepatotoxicity.(2006).
