Cayman的碱性磷酸酶（ALP）比色活性测定试剂盒提供了一种方便的方法，用于在血清、血浆、组织样本和细胞裂解液中测量ALP活性，检测限为0.5 U/L。ALP活性的测量是通过监测色原性底物对硝基苯磷酸酯（pNPP）的脱磷酸作用来完成的。在第一步中，ALP使pNPP脱磷酸生成对硝基苯酚。在第二步中，酚羟基在碱性条件下被脱质子，生成对硝基苯酚盐，产生强烈的黄色，可以使用405纳米处的吸光度来测量。在ALP活性成为速率限制步骤的情况下，405纳米处吸光度的增加与样本中的ALP活性直接成比例。
需要但未提供的：请下载试剂盒手册，以验证是否需要超纯水（Milli-Q或等效物）或该测定的其他任何组分。
警告：本品不适用于人类或兽医用途。
测定方案：
艾美捷Cayman的碱性磷酸酶比色活性检测试剂盒（#701710-480），用于在血清、血浆、组织样本和细胞裂解液中测量ALP活性，检测限为0.5 U/L。ALP活性的测量是通过监测色原性底物对硝基苯磷酸酯（pNPP）的脱磷酸作用来完成的。在第一步中，ALP使pNPP脱磷酸生成对硝基苯酚。在第二步中，酚羟基在碱性条件下被脱质子，生成对硝基苯酚盐，产生强烈的黄色，可以使用405纳米处的吸光度来测量。在ALP活性成为速率限制步骤的情况下，405纳米处吸光度的增加与样本中的ALP活性直接成比例。
预实验准备：
试剂准备
1. ALP测定缓冲液
此瓶含有30毫升的ALP测定缓冲液（项目编号400083），可直接使用。
2. ALP底物
此瓶含有作为ALP底物的pNPP片剂（项目编号400112）。将两片片剂溶解在2.7毫升ALP测定缓冲液中。这是足够测定一个96孔板的底物体积。注意：为了防止污染片剂，避免用手直接接触片剂。保护ALP底物溶液免受光线照射。它在室温下稳定四小时。
3. ALP阳性对照
此瓶含有10微升的牛ALP作为阳性对照。将4微升的ALP阳性对照（项目编号400113）与396微升的ALP测定缓冲液混合，得到ALP阳性对照（100X）库存溶液。进一步将ALP阳性对照（100X）库存溶液稀释，将4微升的ALP阳性对照（100X）与396微升的ALP测定缓冲液混合，得到ALP阳性对照（1X）工作溶液。ALP阳性对照（1X）工作溶液在室温下稳定四小时。两种稀释的ALP阳性对照酶库存在4℃下至少稳定72小时。
4. ALP停止溶液
此瓶含有2M氢氧化钠（NaOH）溶液。将2.5毫升的ALP停止溶液（项目编号400114）与7.5毫升的纯水混合，最终浓度为500mM。稀释的ALP停止溶液在室温下至少稳定一个月。
添加和恢复
测定缓冲液、小鼠肝组织提取物和人血清被添加了ALP，并使用ALP比色活性测定试剂盒进行分析。通过与在缓冲液中测量的相同添加物的活性比较，计算了血浆和组织提取物中ALP的百分比恢复。结果如下。误差条代表ALP活性多次测量之间的标准偏差。
图. 小鼠肝组织提取物和人血清中的添加和恢复。
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