封闭液的选择主要基于抗体和目标蛋白，日常内参，还有一些本底丰度比较高的蛋白用脱脂牛奶封闭没问题；磷酸化蛋白可采用BSA，如若丰度很低，或测上清分泌蛋白个人比较推荐使用成品快封，脱脂牛奶和BSA效果其实都不太稳定。
封闭液主要有以下几种：脱脂奶粉、牛血清白蛋白（BSA）、血清、明胶和聚乙烯吡咯烷酮（PVP）。
一、5%脱脂牛奶
封闭时间：室温1-2h或者4度过夜。
脱脂奶粉zui常用和便宜的封闭剂，通常使用浓度为2.5%-5%。其优点是经济实惠且效果良好，但缺点是如果目标蛋白被磷酸化，则不应使用脱脂奶粉，因为牛奶中的酪蛋白会与抗磷酸化抗体结合，导致非特异性结合和高背景信号。
一般5%脱脂牛奶pH大约为6.0左右，有些研究称脱脂奶粉需调PH到7.4左右，但是大多数抗体不调pH也可以做出来，封闭后可采用1*TBST漂洗10分钟再孵育一抗。
⚠️注意事项：
1、日常保存放4度，变质析出后不要再继续使用，配置新的5%脱脂奶粉。
2、配置新的5%脱脂奶粉时可用磁力搅拌使其充分溶解，充分溶解后再使用。
二、BSA（牛血清白蛋白）
BSA是从牛血清中提纯的白蛋白，通常使用浓度为2%-5%。优点是纯度较高，不容易产生非特异性结合，适合对背景要求严格的实验。缺点是BSA制剂可能含有磷酸化酪氨酸，会引起抗磷酸酪氨酸抗体的高背景，且与凝集素探针不相容。
封闭时间：室温1h，对于一些背景非常高的抗体，可以4℃过夜。
除了脱脂奶粉之外，比较常用的封闭剂，浓度可选2-5%。
磷酸化蛋白建议采用BSA或快封，BSA效果不稳定，如果使用BSA封闭一般，可以试试用快速封闭液。
三、全血清
通常使用的浓度为 5-10%
使用率较低，价格昂贵。
对比脱脂奶粉和BSA也没有什么好处，一般不选择。但血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间的结合，BSA无法封闭Fc受体。
四、成品快速封闭液
封闭时间很快，基本只需要10-15min即可，也有一些是需要30min。
每个成品封闭液都有自己的Protocol，基本照做就没问题。
成品快封通常含有提纯过的蛋白，这种封闭液比脱脂奶粉和BSA好的地方是里面不含有各种乱七八糟的增强背景的蛋白成分。
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