摘要：本研究旨在探讨肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor, HGF）基因通过肾脏电转染方法对大鼠肾缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion injury, IRI）的保护作用。通过构建hHGF基因表达载体，并利用威尼德电转染系统将其导入大鼠肾脏，观察其对肾功能、组织学改变及细胞凋亡的影响。结果表明，hHGF基因电转染能有效减轻肾缺血再灌注损伤，为肾保护提供新的策略。
肾缺血再灌注损伤是临床肾脏移植、肾脏部分切除术及主动脉瘤手术等过程中的常见并发症，严重影响肾脏功能及患者预后。肝细胞生长因子（HGF）作为一种多功能生长因子，具有显著的抗纤维化、促血管生成及抗凋亡作用，对肾脏具有保护作用。然而，外源性HGF半衰期短，需频繁给药，限制了其临床应用。基因治疗为解决这一问题提供了新思路。
本研究通过构建hHGF基因表达载体，并利用肾脏电转染技术，将hHGF基因直接导入大鼠肾脏，探讨其对肾缺血再灌注损伤的保护作用，旨在为临床肾保护提供新的策略。
雄性Sprague-Dawley大鼠（体重250-300g）购自某实验动物中心，饲养于SPF级动物房，自由饮水进食。所有动物实验均遵循实验动物伦理委员会指导原则。
采用PCR方法从大鼠肝脏组织中扩增hHGF基因编码区序列，克隆至pcDNA3.1（+）载体中，构建hHGF基因表达质粒（pcDNA3.1-hHGF）。质粒经测序验证无误后，用于后续实验。
采用某试剂公司的电转染试剂及威尼德电转染仪进行肾脏电转染。
将大鼠随机分为三组：假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（IRI组）及hHGF基因电转染组（hHGF组）。每组10只大鼠。
大鼠经腹腔注射麻醉后，行右侧肾切除术。Sham组仅暴露左侧肾脏，不进行夹闭；IRI组及hHGF组暴露左侧肾脏后，用无创动脉夹夹闭左肾动脉45分钟，松开夹子恢复血流，建立肾缺血再灌注模型。hHGF组在缺血前3天，经肾动脉注射pcDNA3.1-hHGF质粒（50μg/只），并使用威尼德电转染仪进行肾脏电转染，参数设置为电压100V，脉冲长度50ms，脉冲间隔50ms，脉冲次数5次。
再灌注24小时后，腹腔注射过量处死大鼠，采集血液及左侧肾脏组织。血液用于检测血清肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）水平；肾脏组织部分用于HE染色观察组织学改变，部分用于TUNEL染色检测细胞凋亡，部分用于Western blot检测HGF蛋白表达。
与Sham组相比，IRI组血清Scr和BUN水平显著升高（P<0.01）；而hHGF组血清Scr和BUN水平较IRI组明显降低（P<0.05），但仍高于Sham组（P<0.05）。
HE染色结果显示，Sham组肾小管结构清晰，上皮细胞完整；IRI组肾小管上皮细胞肿胀、坏死，管腔扩张，间质充血水肿；hHGF组肾小管损伤程度较IRI组减轻，上皮细胞肿胀减轻，管腔扩张程度降低 。
TUNEL染色结果显示，Sham组肾小管上皮细胞未见凋亡细胞；IRI组肾小管上皮细胞凋亡细胞增多；hHGF组肾小管上皮细胞凋亡细胞数量较IRI组减少 。
Western blot结果显示，hHGF组肾脏组织中HGF蛋白表达水平较Sham组和IRI组显著升高（P<0.01）。
本研究通过构建hHGF基因表达载体，并利用肾脏电转染技术，成功将hHGF基因导入大鼠肾脏，观察其对肾缺血再灌注损伤的保护作用。实验结果显示，hHGF基因电转染能有效减轻肾缺血再灌注损伤，改善肾功能，减轻组织学改变及细胞凋亡。
肾脏电转染作为一种非病毒基因转移方法，具有操作简便、高效、安全等优点。本研究采用威尼德电转染仪进行肾脏电转染，通过优化电转染参数，实现了hHGF基因在肾脏组织中的高效表达。Western blot结果显示，hHGF组肾脏组织中HGF蛋白表达水平显著升高，证实了hHGF基因成功转染并表达。
HGF作为一种多功能生长因子，具有显著的抗纤维化、促血管生成及抗凋亡作用。本研究结果显示，hHGF基因电转染能有效减轻肾缺血再灌注损伤，改善肾功能。这可能与HGF促进肾小管上皮细胞增殖、抑制细胞凋亡、减轻炎症反应及促进血管生成等作用有关。HE染色及TUNEL染色结果进一步证实了hHGF基因对肾缺血再灌注损伤的保护作用。
本研究为肾缺血再灌注损伤的基因治疗提供了新的策略。然而，本研究仍存在一些局限性。首先，实验仅观察了hHGF基因电转染对短期肾缺血再灌注损伤的保护作用，未探讨其对长期肾功能的影响。其次，实验未对hHGF基因在肾脏组织中的分布及持续表达时间进行深入研究。未来研究可进一步探讨hHGF基因在肾脏组织中的分布特点、持续表达时间及其对长期肾功能的影响，为临床应用提供更为详实的实验依据。
此外，本研究采用的肾脏电转染方法虽然操作简便、高效，但仍存在一定的组织损伤风险。未来研究可探索更为安全、高效的基因转移方法，如超声微泡介导的基因转移、纳米载体介导的基因转移等，以提高基因治疗的安全性和有效性。
本研究创新性地采用肾脏电转染技术将hHGF基因导入大鼠肾脏，探讨其对肾缺血再灌注损伤的保护作用，为肾保护提供了新的策略。hHGF基因电转染具有操作简便、高效、安全等优点，有望成为肾缺血再灌注损伤基因治疗的新方法。
在临床应用方面，hHGF基因电转染可用于肾脏移植、肾脏部分切除术及主动脉瘤手术等过程中的肾保护。通过术前或术中给予hHGF基因电转染，可有效减轻肾缺血再灌注损伤，改善肾功能，降低术后并发症发生率，提高患者预后。此外，hHGF基因电转染还可用于慢性肾脏病、急性肾损伤等疾病的治疗，为肾脏疾病的基因治疗提供新的思路。
本研究通过构建hHGF基因表达载体，并利用肾脏电转染技术，成功将hHGF基因导入大鼠肾脏，观察其对肾缺血再灌注损伤的保护作用。实验结果显示，hHGF基因电转染能有效减轻肾缺血再灌注损伤，改善肾功能，减轻组织学改变及细胞凋亡。本研究为肾缺血再灌注损伤的基因治疗提供了新的策略，具有广阔的临床应用前景。未来研究可进一步探讨hHGF基因在肾脏组织中的分布特点、持续表达时间及其对长期肾功能的影响，为临床应用提供更为详实的实验依据。
