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微滴式数字PCR的技术特点介绍与应用

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2025/1/6 13:49:00
  微滴式数字PCR(Droplet Digital PCR,ddPCR)主要是通过对PCR反应体系进行液相的有限稀释,将一个体系分割为数万个以上皮升级的微滴。每个微滴即一个独立的反应单元,每个反应单元所含的DNA模板分子个数符合泊松分布数学模型。最后,通过测定每个反应单元的荧光信号并结合泊松分布,可以计算出测定样本的绝对拷贝数。
 
  微滴式数字PCR技术特点:
 
  高通量:微滴式数字PCR仪能够同时处理多个样品,每个样品又被分割成成千上万个微滴进行反应,从而实现了高通量的基因分析。
 
  高灵敏度:该技术能够识别并放大非常低浓度的靶标核酸,即使样本中病毒的含量极低,也可以通过这一技术进行有效检测。这种高灵敏度使其成为检测低丰度样本的理想工具。
 
  绝对定量能力:微滴式数字PCR不依赖内参基因或标准曲线进行定量分析,而是直接计算每个微滴中阳性反应的比例,从而提供样本中靶标分子的绝对数量。这简化了定量分析过程,减少了潜在的误差,保障了数据的精确性。
 
  减少干扰,提高一致性:由于每个微滴是一个独立的反应单元,这一设计有效减少了PCR抑制剂的影响,并防止了不同核酸分子扩增产物之间的相互干扰。因此,微滴式数字PCR的结果一致性和重复性较高,是确保数据可靠性的有效技术手段。
 
  应用领域:
 
  疾病相关分子标记物检测:微滴式数字PCR仪可用于检测与疾病相关的分子标记物,如肿瘤标志物、遗传病相关基因等。
 
  稀有突变序列检测:该技术能够准确检测样本中含量极低的稀有突变序列,为遗传病诊断、肿瘤早期筛查等提供有力支持。
 
  病原微生物检测:微滴式数字PCR仪可用于检测各种病原微生物,如病毒、细菌、真菌等,为感染性疾病的诊断和治疗提供重要依据。
 
  食品安全及转基因成分检测:该技术可用于检测食品中的转基因成分、农药残留、添加剂等有害物质,确保食品的安全性和合规性。
 
  拷贝数变异遗传分析:微滴式数字PCR仪可用于分析基因拷贝数变异,为遗传病研究、基因治疗等提供重要信息。
 
  基因表达分析:该技术可用于研究基因在不同条件下的表达水平,为基因功能研究、药物筛选等提供有力支持。
 

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