过表达慢病毒是一种基于慢病毒载体的基因传递系统。慢病毒是一类单链RNA病毒，其基因组可以整合到宿主细胞的染色体上，从而实现长期稳定的基因表达。通过将目的基因克隆到慢病毒载体中，利用慢病毒的包装质粒和辅助质粒共同转染到包装细胞中，经过包装、成熟和释放等过程，获得含有目的基因的慢病毒颗粒。这些慢病毒颗粒可以感染宿主细胞，将目的基因整合到宿主细胞的染色体上，实现目的基因的过表达。制备方法如下：
1.目的基因的克隆：需要将目的基因克隆到慢病毒载体中。常用的慢病毒载体有pLenti6/V5-DEST、pLenti-CMV/TO-Puro-DEST等。将目的基因插入到慢病毒载体的多克隆位点，构建重组质粒。
2.包装细胞的培养：常用的包装细胞有293T、293FT等。将这些细胞培养至适当的密度，以便于后续的转染实验。
3.转染实验：将重组质粒与慢病毒的包装质粒和辅助质粒共同转染到包装细胞中。常用的转染方法有磷酸钙沉淀法、脂质体介导法等。
4.病毒收集与纯化：转染后48-72小时，收集包装细胞上清液，通过超速离心、过滤等步骤，纯化得到高滴度的慢病毒颗粒。
5.病毒滴度测定：通过荧光定量PCR、流式细胞术等方法，测定慢病毒颗粒的滴度，以便后续的感染实验。
过表达慢病毒的应用：
1.基因功能研究：通过感染宿主细胞，实现目的基因的过表达，从而研究该基因在细胞生长、凋亡、分化等过程中的作用。
2.药物筛选：通过感染肿瘤细胞，建立稳定的药物筛选模型，用于抗肿瘤药物的筛选和评价。
3.基因治疗：通过感染患者细胞，实现目的基因的过表达，从而达到治疗疾病的目的。例如，可以用于治疗遗传性疾病、免疫缺陷病等。
