人β-淀粉样蛋白1-42（图1）是阿尔茨海默症(AD)患者大脑沉积斑块的主要成分。AD病理学、诊断工具和潜在药物的日常研究需要不间断地供应β-淀粉样蛋白。但据报道，由于C末端的高疏水性，以及序列预沉积导致的树脂上聚集，β-淀粉样蛋白(1-42)难以通过传统的固相多肽合成(SPPS)制备。β-淀粉样蛋白自动合成的最新进展包括红外加热和新的偶联试剂组合，能以更短的循环时间更好地合成疑难疏水肽。本文在Symphony® X 24通道多肽合成仪平行上探索了不同合成方法下β-淀粉样蛋白的合成效率。
使用Rink Amide ChemMatrix™ (0.47 mmol/g)和R TentaGel™树脂(0.19 mmol/g)、PurePep™试剂：HDMA/OxymaPure™或HDMC/OxymaPure和DIPEA和预装Fmoc氨基酸(1:1:1:2)，在Symphony® X合成仪上，按10倍过量、规模50 µmol的条件合成多肽。测试了两种合成方法：
方法A：脱保护2 x 3 min，偶联2 x 5 min，25°C。
方法B：脱保护2 x 30 s，90°C ，偶联2 x 1 min，90°C，红外加热。
Symphony X多肽合成仪功能灵活，可同时测试5种独立的β-淀粉样蛋白合成条件。HDMA（表1）和HDMC（表2）各与OxymaPure试剂组合，使用Rink ChemMatrix或R TentaGel树脂，按较慢的方法A合成β-淀粉样蛋白，所得粗品的纯度相近。最高纯度来自HDMA/OxymaPure试剂和Rink Amide ChemMatrix树脂的搭配（图2）。
升高温度(90°C)和加快反应（方法B）后，HDMA/OxymaPure/DIPEA试剂与Rink Amide ChemMatrix树脂搭配的粗品纯度为33.9%。加快方法+高温+HDMA搭配的合成纯度与慢方法（表1）的相近。
表1.使用HDMA/OxymaPure/DIPEA试剂按方法A合成β-淀粉样蛋白，所得粗品纯度和产率。
表2.使用HDMC/OxymaPure/DIPEA试剂按方法A合成β-淀粉样蛋白，所得粗品纯度和产率。
12 - ß-淀粉样蛋白 – 4.940
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1
使用Symphony X多肽合成仪，可在24h（常温）或17h（90℃）内同时评测24种合成条件，并且在仪器上完成自动肽链切割
2
评测了6种不同合成条件（温度、树脂和偶联试剂组合），初步确定了疏水肽纯度和产率的最佳合成条件
3
使用新型多肽试剂HDMA，通过快速方法和红外加热(90°C)，在Symphony X多肽合成仪上成功地合成了β-淀粉样蛋白(1-42)-NH2
4
在此基础上可对疏水长链肽（如β-淀粉样蛋白）合成的进一步优化，包括缩短偶联时间、改用新的偶联试剂组合
