冷冻干燥保藏转接技术:
建议用下列方法恢复培养冷冻干燥保藏的菌种。
1、安瓶管开封
用浸过70%酒精的脱脂棉擦净安瓿管。
用火焰将安瓿管顶端加热。
滴无菌水至加热的安瓿管顶端使玻璃开裂。
用挫刀或镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端。
2、菌株恢复培养
用无菌吸管,吸取0.3-0.5ml适宜的液体培养基,滴人安瓿管内,轻轻振荡,使冻于菌体溶解呈悬浮状。
取0.1-0.2ml菌体悬浮液,移植于适宜的琼脂斜面/平板培养基上,剩余的菌液,注入适宜的液体培养基内,然后在建议的温度下培养。
3、注意事项
菌种活化前,请将安瓿管保存在6一10℃的环境下。
厌氧菌的培养,如无特别说明,自开封至接种完成,均需以无氧气体充填,以保持厌氧状态。
某些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,需连续两次继代培养才能正常生长,此时请将步骤二重复一次。
转接方法:
真菌转接需使用的接种工具为接种钩、铲,其样式大小。制造的金属可用铂丝或镍丝,也可使用电炉丝,原则是软硬度适当,能经受反复火焰烧红。接种真菌的接种钩、铲,其丝的直径以1毫米比较适合。步骤:右手执针(铲、钩等),左手执管,烧针灭菌,拔塞烧口,挑菌移植,烧口塞管,烧针灭菌等。
右手执接种钩、铲,使前端细丝的部位全部在火焰上烧红杀菌,左手执斜面试管,试管口在拔塞前快速通过火焰,不要使试管口过热;
接种钩、铲前端细丝的部位全部烧红后插入70%无菌酒精里,拿出再烧红,空气中自然冷却或放入70%无菌酒精瓶内冷却,再将接种钩、铲前端细丝的部位快速通过火焰除去酒精;
用接种接种钩、铲挑取菌块移植到新的斜面培养基上(斜面试管管口灭菌)后;
试管口和塞子快速通过火焰灭菌,不要使试管口过热或使棉塞着火;
斜面试管口塞紧硅胶塞或棉塞,将接种钩、铲接触真菌的部位烧红后放入70%无菌酒精瓶中;
接种后的试管放25℃(无特殊温度要求的真菌)培养箱培养。