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液相质谱(LC-MS)中生物样本预处理方法的选择

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2025/1/10 17:08:37

        生物样本分析主要考虑的问题包括浓度低、干扰多、取样勺、个体差异大、应视样品类型、目标分析物的性质选择合适的的样品处理方法。

生物样本预处理方法有

一、蛋白沉淀法(PPT)

二、液液萃取法(LLE)

三、固相萃取法(SPE)

四、其他预处理方法:超滤膜过滤、稀释、柱切换、衍生化、免疫亲和萃取(IAC)、酸或者酶水解;

一、蛋白沉淀法(PPT)

蛋白沉淀法(PPT)通过加入有机试剂、酸碱性试剂、中性盐和酶等蛋白沉淀剂,是蛋白质变性、达到除杂效果。

优点:具有操作简单、便捷、经济等特点。

缺点:大量样品导致多次操作,耗时,效率低,而且蛋白沉淀后的样品净化程度较低,导致基质效果高,目标物响应低。

适用范围:适合样品量少的极性小分子化合物


液相质谱(LC-MS)中生物样本预处理方法的选择

二、液液萃取法(LLE)

液液萃取法(LLE)采用与水互不相容的有机溶剂,将目标物从水相提取至有机相的方法。

优点:液液萃取法(LLE)适合非极性至中等极性的分析物,具有富集浓缩效果,降低基质效应,成本低,方法易转移,已开发。

缺点:不适用于亲水极性物质,操作中易污染,耗时较长

适用范围:需要根据分析物性质,考虑有机溶剂特性、体积、pH对提取效果影响;宜选择对分析物溶解度大、沸点低、易浓缩、与水不互溶、无毒、稳定、不易乳化的溶剂。

三、固相萃取法(SPE)

SPE利用小柱不同填料类型,实现正相、反相、离子交换等等不同的分离模式,选择性的保留分析物而使干扰物流出,或反之,达到净化目的。

优点:适用生物样本范围广,可富集痕量样本分析

缺点:操作繁琐,耗时长,成本高,需要丰富的操作技巧。

适用范围:适用于从极性到非极性生物样本多种类型的生物样本,可富集痕量样本分析。

96孔正压固相萃取仪

液相质谱(LC-MS)中生物样本预处理方法的选择

以上三种是生物样本常见的预处理方法,奥96孔固相萃取仪可支持蛋白沉淀(PPT)、液液萃取(LLE)、固相萃取(SPE),可同时操作96个样本,简化操作步骤,缩短萃取时间,通过气动控制保障很好的平行性和回收率,排除因人员操作误差而导致的结果不准确。

四、  其他预处理办法:

稀释法,样品经一定体积的稀释液稀释后直接进样。

优点:操作简单,耗时少,成本低

缺点:不适用浓度低的样本,基质效果明显。

使用范围:适用尿液、泪液、脑脊液等比较干净样本



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