人维生素B12，维生素B12试剂盒使用说明书

人维生素B12，维生素B12试剂盒使用说明书

检测范围： 96T
25 ng/L -600 ng/L

使用目的：
        本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中维生素B12（VB12）含量。
人维生素B12，维生素B12试剂盒实验原理
         本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人维生素B12（VB12）水平。用纯化的人维生素B12（VB12）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入维生素B12（VB12），再与HRP标记的维生素B12（VB12）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的维生素B12（VB12）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人维生素B12（VB12）浓度。
人维生素B12，维生素B12试剂盒组成 
         1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶
         2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（1200ng/L） 0.5ml×1瓶
         3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
         4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份
         5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张
         6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求 
         1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
         2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
人维生素B12，维生素B12试剂盒操作步骤
         1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
600ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
300 ng/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
150 ng/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
75 ng/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
37.5 ng/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

        2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
        3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
        4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
        5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
        6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
        7. 温育：操作同3。
        8. 洗涤：操作同5。
        9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
       10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
       11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。