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链脲佐菌素/STZ的使用方法--上海榕柏生物

上海榕柏生物技术有限公司

2012/6/15 10:55:12

链脲佐菌素是一种氨基葡萄糖-亚硝基脲,是一种DNA烷基化试剂,能通过GLUT2葡萄糖转运蛋白(GLUT2 glucose trasport protein)独自进入细胞。对胰腺胰岛胰岛素诱发的β-细胞具毒性。链脲佐菌素对GLUT2阳性神经内分秘肿瘤细胞有毒性作用.

链脲佐菌素(链氮霉素;)

 

  Streptozocin

链脲佐菌素

MF:C8H15N3O7

 

  MW:265.22

 

  CAS:18883-66-4

 

  性状:小片状或棱柱体结晶。有吸湿性。溶于水、低碳醇和酮。熔点115℃(分解)。在水溶液中很快变旋,比旋光度平衡值[α]D25 +39°。zui大吸收波长(乙醇中):228nm(ε 6363)。半数致死量(雌小鼠,腹腔)360mg/kg。有毒。有致癌的可能性。

 

简介:

 STZ对一定种属动物的胰岛β细胞有选择性破坏作用,能诱发许多动物产生糖尿病,一般采用大鼠和小鼠制造动物模型。国外有学者报道选用雄性大鼠制造模型的成模率明显高于雌性大鼠。1型糖尿病与2型糖尿病动物模型的制备与STZ注射的给药方式有关:采用小剂量分次给药的方法,则建立与人类I型糖尿病表现相似的大鼠模型,如采用较大剂量一次性注射的给药方法,则建立与人类2型糖尿病表现相似的大鼠模型。其原理可能与胰岛的损伤程度有关。

 

  Ⅰ型糖尿病模型:静脉或腹腔一次大剂量注射STZ所制得的大速发型糖尿病系胰岛β细胞的直接损害,55mg/kg大鼠腹腔注射STZ,致胰岛分泌减少而致血糖升高,出现糖尿病的表现。多次小剂量注射所制得的迟发型糖尿病模型则与T淋巴细胞介导的β细胞不断破坏有关:30mg/Kg多次注射STZ诱导,这样建立的模型与人类IDDM更接近。

 

  Ⅱ型糖尿病模型:高糖高脂喂养1~2个月的大鼠,再加小剂量一次腹腔注射STZ,剂量在25~40mg/Kg或参考文献(鼠均重不同,本剂量以200克均重为例)。

 

配制方法:

 

柠檬酸缓冲液的配制

 柠檬酸(FW:210.14)2.1g加入双蒸水100mL中配成A液。

 

  柠檬酸钠(FW:294.10)2.94g加入双蒸水100mL中配成B液。

链脲佐菌素配制液

  用时将A、B液按一定比例混合(1:1.32也有按1:1的),PH计测定ph值,调节ph=4.2-4.5,即是所需配置STZ的柠檬酸缓冲液。

 

  注射时用柠檬酸缓冲液以1%的浓度溶解STZ,按空腹体重注射相应的STZ,在30分钟内注射完毕。★STZ容易失活,STZ快速称取后仍要求干燥避光,推荐用干燥铝箔(或锡箔)纸。

 

  禁食12小时以上(一般过夜禁食,不禁水)。禁食的时间越长,STZ对胰岛β细胞的破坏力越明显,即药效越高。所以相对禁食时间延长,可以降低STZ的用量。尾部注射即静脉注射,药物利用率较高,同比腹腔注射,可以节省药量,缺点是操作起来不如腹腔注射方便。

 

  过夜禁食后称重,按大鼠总重量比称取STZ,放一干燥灭菌瓶内,外用锡纸包好,将柠檬酸缓冲液及装STZ的瓶子置冰浴,一起带到动物房,如果注射操作技术不熟练,应两组交替注射,建议分组溶解STZ,比如10只或15只鼠/组。推注的速度快,更容易形成高血糖,推注的速度慢,相对的危险性较低,但也不容易成模,常规操作中多要求快速注射。当然,STZ的剂量是决定血糖高低的主要因素。

 

 

死鼠问题的解决

  鼠的个体差别和空腹(低血糖)抵抗力的差异而致死亡率的不同,开始死亡率高可能主要是血糖突然升高,鼠不适应,或发生了DKA(即酮症酸中毒)。

 

  首先,一定要保证足够的饮水量(饮水量不足容易导致死鼠);

 

  其次,高血糖和低血糖都会造成死鼠,避免死鼠可以通过注射胰岛素或暂时补糖,两种途径:1、常见为血糖过高。补胰岛素法,补一些中效胰岛素。例如给诺和灵n或NPH(中性鱼精蛋白锌胰岛素),每次2--3个单位,过了3-5天,大鼠一般死亡率就低了;2、补糖法,禁食后的鼠,注射的时候已经处于低血糖状态,造模4小时后腹腔注射百分之20的葡萄糖,可避免因注射时血糖过低死鼠;

 

  再次,防止动物自相残杀。食物缺乏和供水不足的情况下,会互相厮杀、啃食同类,所以食物和饮水要供应充足,是两路供应;

 

  zui后,防止感染。糖尿病大鼠尿量多,垫料潮湿,需要勤换垫料,所以糖尿病大鼠较其他大鼠容易出现感染,特别是泌尿道感染和腹腔感染。腹腔注射、皮下注射及采血测血糖等侵入性操作前后,要注意消毒工作。如每次采血测血糖后可用四环素(或金霉素眼药膏)局部涂抹处理伤口预防感染。

 

  模型不*,三天后补注STZ(以10mg-20mg/kg体重剂量腹腔注射),也很容易成模,或让血糖恢复正常后再常规剂量注射;但要达到理想的效果,往往是恢复到正常状态下重新造模

保存方法:

-8℃,干燥避光保存。(注:本品易潮解,如需反复取量过程中,应避免接触其受水受潮,受潮后30分钟后失效,这和注射时要求其快速注射是一个道理,即其水溶液不稳定)。

 

  链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)对机体组织毒性相对较小,动物存活率高,是目前国内外使用较多的制备糖尿病动物模型的药物。--链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ,1g/瓶(灭菌装)=900/g;1g/瓶(普通装)=750/g;5g/瓶=700/g),min≥98.89,SigmaS0130)产品,使您的研究没有后顾之忧。--上海榕柏生物技术有限公司--技术部转

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