培养基的制备

一、目的与要求：

（一）学习制备培养基的基本技术。

（二）制备牛肉膏蛋白琼脂培养基。

二、原理：

培养基的制备：

牛肉膏蛋白培养基是一种应用zui广泛和zui普通的细菌培养基，这种培养基中含有一 般细菌生长繁殖所需要的zui基本的营养物质，可供作繁殖之用，制作固体培养基时须加 2%琼脂（营养琼脂），培养细菌时，应用稀酸或稀碱将 PH 调至中性或微碱性。牛肉膏蛋白培养基的 配方： 牛肉膏 0.5%，蛋白胨 1%，NaCl0.5%，pH7.4～7.6。

 三、材料与仪器：

（一）试剂 （二）其他 牛肉膏，蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。
试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，漏斗，乳胶管，弹簧夹，纱布，棉花，牛
皮纸，线绳，pH 试纸，电炉，台称。

 四、操作步骤：

（一）称量 根据用量按比例依次称取成分，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或
表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，蛋白胨易吸湿，称量时要迅速。

（二）溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量，加热，ZHU 一加入各成分，使其溶
解，琼脂在溶液煮沸后加入，融化过程需不断搅拌。加热时应注意火力，勿使培养基烧 焦或溢出。溶好后，补足所需水分。

（三）调 PH 用 1mol/L NaOH 或 1mol/L HCl 把 PH 调至所需范围。

（四）过滤 趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些实验结果的观察，如无特殊
要求时可省去此步骤。

 （五）分装：

按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三解瓶内，分装装置分装时注意，勿使培养基沾染在容器口上，以免沾染棉塞引起污染。 1．液体分装 分装高度以试管高度的 1/4 左右为宜，分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的 1/2 为宜。 2．固体分装 分装试管，其装量不超过管高的 1/5，灭菌后制成斜面，斜面长度不超过管长的 1/2。分装三解瓶，以不超过容积的 1/2 为宜。 3．半固体分装 装置以试管高度的 1/3 为宜，灭菌后垂直待凝。

（六）加棉塞：
分装完毕后，在试管口或三解瓶口塞上棉塞（或泡沫塑料塞及试管帽等，以阻止外界微生物进入培养基而造成污染，并保证有良好的通气性能。

 （七）包扎：

（八）保存：

无污染方可使用。

 五、实验报告：

（一）结果

（二）思考题

1．培养基配制时应注意什么问题？为什么？

2．分装培养基时为什么要使用弹簧夹？

3．培养基配好后，为什么要立即灭菌？ 说明你配制培养基过程中的情况。 棉塞头上包一层牛皮纸，扎紧，即可进行灭菌。 灭菌后的培养基放入 37℃养箱中培养 24 小时，以检验灭菌的效果，