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RNA提取过程经验分享

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2012/12/5 22:50:24
1.RNA提取的样品很重要,包括样品的质量,细胞数,杂质含量等等,建议:按照说明书的要求,每毫升TRIzol不超过100mg再低些在50mg左右;样品的质量一定要控制好;研磨得时间不宜过长,成粉状即可,液氮常加(研磨的意义主要是使细胞与TRIzol的作用更充分,如有团块挑出取质舍量);作用时间15分钟;
 
2.氯仿抽提,一定要混匀,剧烈些没关系。但一定要充分作用;
 
3.异丙醇沉淀,混匀,冰上操作会在一定程度上增加RNA产量;
 
4.75%乙醇清洗一次即可,速度我一般选择高速8000g-10000g之间的,结果都可;
 
5.检样,zui主要的是配置的琼脂糖胶和电泳缓冲液一定要避免RNA酶的污染,如果有固相RNA酶去除剂,可以用其处理电泳槽5-10后(时间以说明书为准),用高压后的DEPC水冲洗即可,方便,呵呵;
 
以上是我认为在RNA提取过程的体会,欢迎大家讨论,至于反应的时间按照说明书调整,其实说明书已经放的比较宽了,这个我觉得没有必要讨论。

 

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