酸多粘菌素酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
1 酶免分析步骤
1.1 实验须知
1.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（252℃），时间约2小时。回温至室（252℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存
注：一定保证回温充分，否则影响检测的度和准确度。
1.1.2 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存
1.1.3 请不要改变分析程序
1.1.4 请使用的微量移液器
1.1.5 操作一旦开始，请不要中断任何程序
1.1.6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作
1.1.7 为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样
1.1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面
1.2 分析步骤
1.2.1 预*行编号，标记B0、标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测
1.2.2 取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存
1.2.3 样品稀释液（10）、浓缩洗涤液（20）稀释成工作液（蒸馏水或去离子水稀释）
1.2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml标准品溶液
1.2.5 在各标准孔中加入50μl的标准品溶液
1.2.6 在各样品孔中加入50μl样品溶液
1.2.7 在所有孔中加入50μl的抗硫酸多粘菌素抗体酶结合物
1.2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。
1.3 37℃温浴30min （温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）
1.3.1 甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，zui后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液体。
1.4 反应
1.4.1 洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50μl显色液A，再加 50μl显色液B；轻微晃动反应板使之*混匀
1.4.2 37℃温浴10min
1.4.3 每孔中加入50μl终止液，混匀
1.4.4 在450nm下检测吸光度，结果在5min内读取。
2 结果计算
2.1定量分析
2.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以*个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0μg/L标准溶液的平均吸光度值
2.1.2以硫酸多粘菌素浓度的对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为硫酸多粘菌素浓度的对数值，求得反对数即为测定液中硫酸多粘菌素浓度C（ppb）
2.1.3由于样品经过了预先稀释，因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。
2.2 半定量测定
2.1.1目测半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品吸光度值的高低比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。
2.1.2仪器半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品颜色深浅比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。
3 特异性
物质 交叉反应
硫酸多粘菌素 100%
硫酸多粘菌素A……………………＜0.01%
硫酸多粘菌素B……………………＜0.01%
硫酸多粘菌素C……………………＜0.15%
硫酸多粘菌素D……………………＜0.2%
硫酸多粘菌素E……………………＜0.05%
4 试剂盒参数
本试剂盒检测下限为0.05ppb
B0吸光度*值应大于1.0
试剂盒吸光度板内误差小于8％，板间误差小于15％。
用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80％。
5 标准曲线模式（仅供参考）
试剂盒提供的标准曲线范围为0.1ppb~8.1ppb 。
6 分析限制
本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLC或GC/MS加以确证。
