所需仪器:XL03RH型控温离心机(低速冷冻离心机,可使用24*15ml离心管,水平转子)
1) 将30ml血液加到含有Na2EDTA的抗凝管里(终浓度5.5mmol/L)
2) 制备1.084g/cm3和1.065g/cm3 Iodixanol溶液
方法如下:
Iodixanol:60% Iodixanol溶液(Optiprep)
稀释介质:RPMI 1640 + 10%胎牛血清。
1.084g/cm3溶液:1.5ml 60% Optiprep + 4.5ml稀释介质
1.065g/cm3 溶液:3ml 60% Optiprep + 13.4ml稀释介质
3) 全血在570g离心15分钟,弃去上层血浆,取出淡黄色层并与0.4体积的Optiprep混合。
4) 把富含白细胞的血浆/ Optiprep混合物转移到离心管,上面按顺序加入2ml 1.084g/cm3溶液、4ml 1.065g/cm3 溶液和0.5ml稀释介质。
5) 用甩开吊篮转子700g离心15分钟。
6) 降速过程中不制动,收集分界面处的细胞,并且稀释介质稀释。
7) 在400g离心6分钟,把细胞悬浮于适当介质里备用。
湖南湘立研制生产的几款医用离心机可以用来进行细胞分离,如DL5M/TDL5M两种型号的低速冷冻离心机可用来进行干细胞实验。XL03RH型控温离心机(低速冷冻离心机)可用来进行温度敏感型人体细胞分离。