用Metrizozte-Ficoll法分离血液时,淋巴细胞和单核细胞在同一区带,但是单核细胞具有吞噬胶态铁颗粒的能力,使其密度明显增加,用梯度法可使这两种细胞获得分离。
抗凝静脉血在低速离心机中以600g离心10分钟,分离出白细胞,大约1ml,与1ml胶态铁悬浮液混合,在37℃、摇动孵育30分钟,加入等体积的0.9%NaCl溶液,并铺放在3ml Metrizozte-Ficoll介质上,600g离心20分钟,离心后淋巴细胞在分界面处形成区带。
另外,淋巴细胞比单核细胞对渗透敏感,增加梯度介质的渗透压,淋巴细胞更容易失水收缩,密度增加。可用不同渗透压的Nycodenz-NaCl梯度从富含白细胞的血浆中分离单核细胞。当暴露于高渗介质中,淋巴细胞密度增加明显,易于通过屏障介质,单核细胞密度也增加,使之产量下降。使用密度为1.062g/cm3 Nycodenz梯度,渗透压在310mOsm时可获得高纯度的单核细胞,但产量会受到一些影响。
湖南湘立研制生产的几款医用离心机可以用来进行细胞分离,如DL5M/TDL5M两种型号的低速冷冻离心机可用来进行干细胞实验。XL03RH型控温离心机(低速冷冻离心机)可用来进行温度敏感型人体细胞分离。