强直性脊柱炎患者炎症和骨代谢细胞因子的表达及其与中医证型的相关性研究

【作者】 马琳；

【导师】 李振彬；

【作者基本信息】 河北医科大学， 中西医结合临床， 2012， 硕士

【摘要】 目的：强直性脊柱炎（Ankylosing spondylitis，AS）是一种慢性、进行性、炎症性自身免疫病，以侵犯骶髂关节和脊柱等中轴系统为主，亦可不同程度累及外周关节及肌腱附着点。其特征性病理变化为韧带及肌腱附着点炎症，脊柱周围组织骨性强直并伴有局部骨质疏松。其病因及发病机制尚不明确。我国AS患病率为0.3%左右,其中60%左右的患者髋关节受累，久之累及脊柱发生骨性强直，导致残疾。骨破坏及新骨形成是AS致残的关键原因。近年相关研究表明，破骨细胞（osteoclast,OC）在AS骨质破坏及骨质疏松的病理机制中起着重要作用。而成骨细胞和破骨细胞的不平衡在骨病变中起到决定性作用。在炎性骨破坏的整个过程中，一些促炎细胞因子并不直接作用于破骨细胞的分化和激活，而是通过调节肿瘤坏死因子（TNF）超家族中的细胞核因子κB受体活化因子配体（Receptoractivator of nuclear factors κB ligand，RANKL）、细胞核因子κB受体活化因子（Receptor activator of nuclear factors κB，RANK）、骨保护素（osteoprotegerin，OPG）等分子间接发挥作用。RANKL、RANK、OPG为调节破骨细胞活性所必需，是造成炎性关节骨质破坏zui重要的影响因素。而Wnt/β-catenin信号通路对调节骨重塑具有重要作用，Dickkopf-1（DKK-1）、硬骨素（Sclerostin,SOST）为其中的关键因素。本研究拟通过检测活动性AS患者外周血清中巨噬细胞移动抑制因子（macrophage migration inhibitory factor，MIF）、白介素-23（Interleukin-23，IL-23）、RANKL、OPG及DKK-1、SOST的表达，并以活动性类风湿关节炎（RA）患者和健康人为对照，了解促炎症细胞因子MIF、IL-23与骨破坏/骨重塑因素、疾病活动性指标的相关性，以及中医证型与炎性细胞因子、骨破坏/骨重塑因素的相关性，试图进一步探讨AS活动期炎症与骨质破坏的病理机制，为改善骨代谢和延缓骨质破坏寻找新的治疗靶点，并获得活动性AS中医辨证的实验依据，为中西医结合诊治AS探索新的思路和方法。方法：选择活动性AS住院患者30例为实验组，同期选择活动性类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis,RA）住院患者30例和15例正常健康体检者作为对照组，并将实验组患者根据中医辨证进行分型；分别记录AS和RA患者的年龄、性别、病程、红细胞沉降率（ESR）采用魏氏法、C反应蛋白（CRP）采用全自动免疫速率散射比浊法测定。采用BASDAI（Bath ankylosing spondylitis disease activity index）和DAS（Disease activityscore）28分别评价AS和RA病情活动度。清晨空腹采肘静脉血留取血清标本。采用酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测AS患者、RA患者和健康人外周血IL-23、MIF和RANKL、OPG及DKK-1、SOST的水平。进行炎症细胞因子与骨代谢细胞因子的相关性分析，并进一步分析上述炎症和骨代谢细胞因子与AS临床指标、中医辨证分型的相关性。统计学处理：所得数据均采用SPSS13.0软件包进行统计学处理，计量资料所得结果以均数±标准差（±s）表示。若方差齐，各组间均数比较采用单因素方差分析（one-wayANOVA），采用LSD法进行组间两两比较；方差不齐，采用非参数检验。相关性分析采用Pearson相关检验。计数资料采用卡方检验。均以P＜0.05或P＜0.01认为有统计学意义。结果：1一般资料描述AS组：男性25例，女性5例；年龄（18-58）岁，平均年龄（29.43±8.33）岁；病程（0.3-20）年，平均病程（6.73±4.18）年；RA组：男性5例，女性25例；年龄（15-75）岁，平均年龄（46.07±14.79）岁；病程（0.2-16）年，平均病程（4.99±5.15）年；正常对照组男性3例，女性12例，平均年龄（30.20±5.20）岁。AS组： BASDAI （3.94±1.65）； ESR（40.25±29.79）mm/h； CRP（4.78±3.40）mg/dl；RA组：DAS28（6.06±1.25）；ESR（69.79±27.46）mm/h；CRP（4.31±4.25）mg/dl。2血清IL-23（pg/ml）水平比较AS组的IL-23水平（74.90±42.24）高于正常对照组（43.32±16.06），但低于RA组（146.60±117.46），组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。AS组IL-23水平与RA组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。3血清MIF（ng/ml）水平比较AS组MIF水平（25.38±11.05）高于正常对照组（20.58±6.44），低于RA组（37.70±14.19），组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。AS组MIF水平与RA组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。4血清RANKL（pg/ml）水平比较AS组RANKL水平（21.53±17.44）高于正常对照组（8.39±5.88）和RA组（12.12±9.72），但组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。AS组RANKL水平与RA组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。5血清OPG（pg/ml）水平比较AS组OPG水平（5.04±1.65）高于正常对照组（3.39±1.02），但低于RA组（8.48±3.61），组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。 AS组OPG水平与RA组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。6血清DKK1（ng/ml）水平比较AS组DKK1水平（0.71±0.16）高于正常对照组（0.66±0.20）和RA组（0.70±0.28），但组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。AS组DKK1水平与RA组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。7血清SOST（ng/ml）水平比较AS组SOST水平（1.39±0.53）高于正常对照组（0.98±1.02）和RA组（1.43±0.55），但组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。AS组SOST水平与RA组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。8AS患者血清中炎性细胞因子IL-23、MIF水平与临床疾病活动指标的相关性AS患者血清IL-23水平与病程、ESR、CRP和BASDAI均无相关性（r=-0.142，0.088，-0.018，-0.421，P＞0.05）；血清MIF水平与病程呈显著正相关（r=0.496，P＜0.01），与ESR、CRP和BASDAI均无相关性（r=0.361，0.299，0.270，P＞0.05）。9AS患者血清中骨代谢指标RANKL、OPG、DKK1、SOST水平与炎性细胞因子IL-23、MIF水平、临床疾病活动指标的相关性AS患者血清中RANKL水平与病程、ESR、CRP、BASDAI、IL-23、MIF、OPG、DKK1、SOST均无相关性（r=-0.116，0.003，0.147，0.069，-0.008，0.314，0.119，-0.199，0.163，P＞0.05）；OPG水平与病程呈显著正相关（r=0.520，P＜0.01），与ESR呈正相关（分别为r=0.379，P＜0.05）,与CRP、BASDAI、IL-23、MIF、DKK1、SOST均无相关性（r=0.338，0.173，0.379，0.759，0.099，0.252，P＞0.05）；DKK1水平与BASDAI呈正相关（r=0.414，P＜0.05），与病程、ESR、CRP、IL-23、MIF、SOST均无相关性（r=0.128，0.099，-0.013，-0.105,0.087，P＞0.05）；SOST水平与病程、ESR、CRP、BASDAI、IL-23、MIF均无相关性（r=-0.242，0.266，0.354，-0.206，0.020，0.200，P＞0.05）。10AS组中医证型分布及临床相关指标、血清中炎性细胞因子IL-23、MIF水平和骨代谢指标RANKL、OPG、DKK1、SOST水平与各证型的关系10.1AS组中医证型分布：湿热痹阻型3例（10%）、寒湿痹阻型8例（27%）、瘀血痹阻型14例（47%）、肾阳亏虚型2例（6%）、肝肾不足型3例（10%）。可见活动性AS患者中主要为瘀血痹阻型。10.2AS组中医证型与年龄、病程、影像学分级的关系10.2.1肝肾不足型的年龄（40.00±9.17）zui大，湿热痹阻型（27.33±10.69）zui小，在各证型之间差异无统计学意义（P＞0.05）。10.2.2肝肾不足型的病程（14.33±1.53）zui长，湿热痹阻型（4.33±2.47）zui短，病程在各证型之间有显著性差异（P＜0.01）。10.2.3AS组骶髂关节X线分级在各证型之间差异无统计学意义（P＞0.05）。10.3AS组中医证型与ESR、CRP、BASDAI的关系各型中ESR、BASDAI的差异无统计学意义（P＞0.05），而CRP的差异有统计学意义（P＜0.05）。10.4AS组中医证型与IL-23、MIF水平的关系血清IL-23水平在各型中差异有统计学意义（P＜0.05），其中寒湿痹阻型（112.20±57.68）zui高；血清MIF水平在各型中的差异无统计学意义（P＞0.05）。10.S组中医证型与RANKL、OPG、DKK1、SOST的关系血清SOST水平在各型中的差异有统计学意义（P＜0.05），RANKL、OPG、DKK1水平在各型中差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论：1活动性AS患者存在骨代谢异常，血清RANKL、OPG水平明显升高；并且，随着病程的延长，新骨形成机制在关节结构改变过程中发挥主要作用；IL-23、MIF可能通过介导炎症反应间接参与AS骨代谢。2活动性AS患者血清DKK1和SOST水平与ESR、CRP、BASDAI、IL-23、MIF无相关性，可能独立参与活动期AS的发生、进展过程，并可作为进一步研究和干预AS骨代谢异常的新靶点。3传统中医辨证分型提示，瘀血痹阻证为活动性AS的主要证型；不同证型间病程及血清CRP、IL-23和SOST水平存在明显差异；骶髂关节影像学分级与证型分布无明显相关性。现代临床和实验室相关定量/定性指标可能作为活动期AS的中医辨证的客观证据。 更多还原