Bio-Rad推出基于QX100微滴式数字PCR平台的Illumina TruSeq测序文库ddPCR定量试剂盒
2013年Bio-Rad推出基于QX100TM微滴式数字PCRTM平台的Illumina TruSeq测序文库定量试剂盒,用于检测测序文库质量和拷贝数,实现真正对测序文库的全质量控制。
二代测序(NGS)又叫高通量测序,是测序技术革命性的进步,能一次上百万条DNA分子进行序列测定,使得对一个物种的转录组和全基因组进行细致全貌的分析成为现实。如今NGS在生物学研究中的应用变得越来越广泛,目前主流的NGS仪器平台为Illumina、Life Technologies 和 Roche 454。
对于Illumina 的MiSeq和HiSeq高通量测序平台而言,测序文库的定量分析和质量评价对于获得高质量的核酸测序数据十分关键。因为:
1.如果测序文库拷贝数偏低,将不能获得足够的测序数据,导致降低数据产出;
2.如果测序文库拷贝数过高,将产生低质量的测序数据,甚至会导致测序失败。
因此,要控制NGS测序仪上测序文库的载入量,保证测序数据的质量,就需要在测序前对DNA测序文库进行定量分析。此外,为减少NGS运行成本,用户往往需要将不同测序文库等摩尔量合并为一份测序样品同时测序,这也以测序文库的准确定量分析为前提,如此才能保证不同文库的测序数据的可靠性。
以往的llumina TruSeq平台的测序文库定量方法费时费工,且只能提供文库的浓度信息。例如:
qPCR-NGS文库定量法:仅能检测可扩增文库,依赖标准曲线评估文库拷贝数,不能*显示测序文库片段长度的差异,容易受引物二聚体或者背景污染影响,受制于扩增效率从而造成定量结果偏差。
微流体毛细管电泳法:依赖核酸嵌入式染料发出的荧光信号,对于连接错误、单链和/或未扩增片段的定量分析准确性低。
分光光度计法:利用分光光度法,通过测定文库对特定波长的光的吸收度,对文库进行定量分析,准确性差,无法反应测序文库质量。
Bio-Rad QX100TM ddPCRTM测序文库定量试剂盒,可简单快捷地实现对Illumina TruSeq测序文库的质量控制;无缝整合进Illumina TruSeq 测序工作流程,同时提供对测序文库的定量分析(拷贝/微升,还可转成摩尔浓度)和质量评估信息(接头二聚体和测序片段长度等反映测序文库质量的信息):
可对测序文库进行定量,无需标准曲线;还可对测序文库质量进行评估,从而实现对测序文库的质控以提高NGS测序数据质量
相比qPCR更准确的测序文库质量评估
测序文库装定量分析结果可靠性高、重复性好
有助于多样本合并测序时各样本测序文库含量的配平
能无缝整合进Illumina TruSeq 工作流程