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雌二醇 ELISA KIT小鼠雌二醇(E2)ELISA试剂盒说明书

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2013/7/19 12:06:43

 小鼠雌二醇(E2)酶联免疫分析(ELISA)

试剂盒使用说明书

                      厦门慧嘉生物科技有限公司

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称:

通用名:小鼠雌二醇(E2)酶联免疫分析试剂盒

使用目的:

本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆、或相关组织液中雌二醇(E2)的残留含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本小鼠的雌二醇(E2)水平。用纯化的雌二醇(E2)抗体包被微孔板,制成固相体,往包被单抗的微孔中加入雌二醇(E2),再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的雌二醇(E2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品小鼠雌二醇(E2)的含量。

试剂盒组成 

1

20倍浓缩洗涤液

30ml×1

7

终止液

6ml×1

2

酶标试剂

6ml×1

8

标准品(72ng/L

0.5ml×1

3

标包被

12孔×8

9

标准品稀释液

1.5ml×1

4

样品稀释液

6ml×1

10

说明书

1

5

显色剂A

6ml×1

11

封板膜

2张  

6

显色剂B

6ml×1/

12

密封袋

1

标本处理及要求 

1.血清、血浆标本可直接测定;

2.组织:取相关组织1g 5ml PBS中匀浆,室温孵育5小时(期间不时旋涡混合)后,2000-3000/分离心10分钟后,取上清液待测。

3.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

4.采集后尽早进行实验,若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但避免反复冻融。

操作步骤

1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上按序设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;再各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后,在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉;再各取50μl分别加到第五、第六孔中;再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中;再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中;再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。( 稀释后各孔加样量都为50μl,浓 度分别为 48          ng/L32 ng/L ,16ng/L8ng/L4 ng/L)。

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,轻轻晃动混匀

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

4. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 

7. 温育:操作同3

8. 洗涤:操作同5

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10. 终止:每孔加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)

11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔OD值的),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5. 严格按说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

6.本试剂不同批号组分不得混用。

7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.底物请避光保存。

检测范围:40 pg/ml-1000 pg/ml

灵敏度:25 pg/ml


规格:

96人份/

保存条件及有效期

1试剂盒保存:2-8

2.有效期:6个月

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