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小鼠(Mouse)内毒素(ET)ELISA试剂盒

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2013/9/24 11:05:02

 使用说明书

检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预

先包被内毒素(ET)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、

HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB

在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的

黄色。颜色的深浅和样品中的内毒素(ET)呈正相关。用酶标仪在

450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法

1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞

刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地

分离。

2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。

3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟

取上清。

5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于

-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1. 酶标仪(450nm)

2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

操作注意事项

1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20 分钟。从冰箱取出的

浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶*溶解

后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

3. 浓度为0 的S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5 倍,zui终结果乘以5 才是样本实际浓度。

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成

名称96孔配置48孔配置备注

微孔酶标板12 孔×8 条12 孔×4 条无

标准品0.3mL*6 管0.3mL*6 管无

样本稀释液6mL 3mL 无

检测抗体-HRP 10mL 5mL 无

20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释

底物A 6mL 3mL 无

底物B 6mL 3mL 无

终止液6mL 3mL 无

封板膜2 张2 张无

说明书1 份1 份无

自封袋1 个1 个无

注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、5、10、20、40、80 EU/mL

试剂的准备

20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20 稀释,即1 份的20×洗涤缓

冲液加19 份的蒸馏水。

洗板方法

1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min 后甩尽

孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5 次。

2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5 次。

操作步骤

1. 从室温平衡20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封

袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

3. 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不

4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶

(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴

锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去

洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5 次(也可用洗板机洗板)。

6. 每孔加入底物A、B 各50μL,37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL,15min 内,在450nm 波长处测定各孔的

OD 值。

结果判断

绘制标准曲线:在Excel 工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应

OD 值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样

本浓度值。

试剂盒性能

1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R 值,大于等于

0.9900。

2. 灵敏度:zui低检测浓度小于1.0 EU/mL。

3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。

5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。

6. 有效期:6 个月

免责声明

1. 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所

产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。

2. 严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者

承担。

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