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凝集反应实验步骤和原理

上海士瑞化工实业有限公司

2013/12/16 8:17:11

当颗粒性抗原 ( 病原微生物或红细胞 ) 与相应抗体持异性结合,在电解质存在下两者比例适当时,可形成肉眼可见的凝集块,此种现象称为凝集反应( agglutinogen) 。细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原,在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合形成肉眼可见的凝集块,称为直接凝集反应。常用的直接凝集试验有玻片法和试管法两种。
本实验进行玻片凝集反应实验。
一、细菌鉴定
玻片凝集反应 (slide agglutination) 是将已知的抗体直接与未知的颗粒性抗原物质( 如细菌、立克次体、钩端螺旋体等 ) 混合,在有适当电解质存在的条件下,如两者对应便发生持异性结合而形成肉眼可见的凝集物,即为阳性;如两者不对应便无凝集物出现,即为阴性。此法属定性试验,主要用于细菌鉴定和分型等。
【材料】
1 .抗原,大肠杆菌( E.coli ) 18 — 24h 培养物;
抗体, 1 : 10 兔抗大肠杆菌血清。
2. 生理盐水。
3. 洁净载玻片、记号笔、吸管 ( 带乳胶吸头 ) 。
【方法】
1.取载玻片一张平置实验台上,用记号笔划分为 2 格,并标明 1 、 2 。
2.用 1m 1 吸管吸取生理盐水 1 — 2 滴于破片第 1 格内,另取一支吸管,吸取 1 : 10 兔抗大肠杆菌血清 1 — 2 滴于第 2 格内。
3.将接种环在酒精灯火焰上烧灼灭菌,冷却后取少许大肠杆菌培养物与第 1 格内的生理盐水混合,并涂抹成均匀悬液。然后用同样方法烷灼接种环,待冷却后取少许大肠杆菌培养物与第 2 格内的兔抗大肠杆菌血清混合并涂抹成均匀悬液。静置数分钟后观察结果。
【结果观察】
如上述混合悬液由均匀混浊状变为澄清透明,并出现大小不等的乳白色凝集块者即为阳性(+);如混合物仍呈均匀混浊状则为阴性(-)。如肉眼观察不够清楚,可将玻片置于显微镜下用低倍镜观察。
本次实验结果第 1 格内不出现凝集块,反应为阴性。
【注意事项】
取细菌培养物时,不宜过多,与抗血清混合涂抹时,必须将细菌涂散,涂均匀,但不宜涂得太宽,以免很快干涸而影响结果观察。
二 . 人类 ABO 血型鉴定试验
人类 AB() 血型抗原有 A 和 B 两种。 A 型红细胞膜上有 A 抗原, B 型红细胞上有 B 抗原, AB 型有 A 和 B 两种抗原,而 O 型则不含有 A 和 B 抗原。抗 A 、抗 B 分型试剂是分别针对 A 抗原或 B 抗原的特异性抗体。当将已知的抗 A 或抗 B 试剂与受检者红细胞混合时,抗 A 和/或抗 B 血清与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集,根据其凝集状况便可判定受试者的血型。

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