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2010/5/10 11:08:14应用植物激素(Planthormone)抗体进行免疫定量
植物激素(Planthormone)是植物体内合成的对植物生长发育有显著作用的几类微量有机物质,包括生长素(Auxin)、赤霉素(GA)、细胞分裂素(CTK)、脱落酸(ABA)、茉莉酸、激动素和乙烯(ETH)等(点击此处查看“Agrisera植物激素抗体产品信息”)。它们都是些简单的小分子有机化合物,但它们的生理效应却复杂多样。其介导的植物细胞功能包括了从影响细胞的分裂、伸长、分化到影响植物发芽、生根、开花、结实、性别的决定、休眠和脱落等各个环节。
对植物激素进行免疫定量的方法主要有放射免疫分析(RIA)和酶联吸附免疫分析(ELISA),由于前者操作上欠安全等原因,目前常采用后一种类型。在ELISA中,抗原抗体反应的检测依靠酶标记物来实现,常用的酶有辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酯酶(AP)。酶可直接标记激素分子,称为酶标植物激素,也可标记于第二抗体(识别抗激素抗体Fc片段的抗体或金黄色葡萄球菌A蛋白),称为酶标二抗。这两类标记物分别用于固相抗体型和固相抗原型ELISA。
固相抗体型ELISA:将抗激素的单克隆抗体(Mab)与已吸附于固相载体上的兔抗鼠Ig抗体(RAMIG)结合,然后加入激素标准品或待测样品,使其与固相化的Mab结合,再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记激素(酶标激素)。通过测定酶标激素的被结合量,可换算出未知样品中激素的数量。
固相抗原型ELISA:将“激素-蛋白”复合物(该蛋白应不同于免疫原中的载体蛋白)包被于固相载体,加入待测激素(样品或标准品)和抗激素多克隆抗体(Pab)反应,进行竞争反应。然后让HRP标记羊抗兔Ig抗体(HRP-GARIG)与结合在固相上的Pab反应,通过测定与固相结合的酶量,换算出未知样品中激素的含量。
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