人肺癌细胞A-427细胞株

人肺癌细胞A-427细胞株

一、实验目的 了解和掌握动物染色体涂片标本的制作过程。 

二、实验原理  

三、实验材料 青蛙或蟾蜍 

四、实验器具和药品试剂 冰箱、离心机、恒温水浴锅、显微镜、分析天平、药物天平、台称、试管架、离心管、吸管、烧杯、量筒、注射器(1ml、5ml)、5号针头、载玻片、解剖盘、解剖刀、剪刀、镊子、酒精灯、切片盒、切片架、纱布、黑白胶卷。 0.1％秋水仙素溶液、0.046M KCL 溶液、1％柠檬酸钠溶液、甲醇、冰醋酸、磷酸缓冲液、Giemsa原液、冲洗底片的药液。 

五、实验方法和步骤 
(一) 前处理 用台称称量青蛙或蟾蜍的体重，然后按10微克／克动物体重的剂量,腹腔注射秋水仙素。 
(二) 取材 注射4小时后，将动物处死，用剪刀剪开皮肤和肌肉，取出大腿骨和胫骨，剔净股骨上的肌肉，然后用一小块纱布来回搓干净。剪开两端股骨，用注射器（内装5ml 1％ 柠檬酸钠溶液）缓慢冲洗骨髓细胞到离心管中，经平衡后离心8分钟，速度为1000转／分钟。 
(三) 低渗 吸去上清液，留沉淀物0.2ml，加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度，用吸管冲匀沉淀物，在恒温水浴(28℃)处理20分钟或更长一点时间。
 (四) 固定 低渗后，以每分钟1000转速度离心10分钟。用吸管小心吸去上清液，留0.2ml沉淀物，冲散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 冲匀后静止固定20分钟。重复固定1～2次，离心的速度与时间以上述相同。
 (五) 滴片 吸去上清液，留0.2ml沉淀物，加4滴新配的固定液，冲匀沉淀物。从冰箱取出预先冷冻的载片，每片滴3滴细胞悬液，立即用嘴向载片上吹气，使细胞均匀分散，在酒精灯火焰上来回烤一下，以助染色体更好分散和展开。 (六) 染色 用10：1 Giemsa染液染色20分钟(Giemsa原液用PH＝6.8磷酸缓冲液稀释)，然后用水冲洗，片干后镜检。 (七) 镜检 在中倍镜下找染色体分散好的中期分裂相，转至高倍镜详细观察两栖类染色体的数目，属于大、中、小染色体各有多少条。

人肺癌细胞A-427细胞株

人胚肺成纤维细胞MRC-5  
人胚肺成纤维细胞CCC-HPF-1  
人胚胎气管组织来源细胞CCC-HBE-2  
人胚胎肺成纤维细胞WI-38  
SV-40Z转化肺成纤维细胞WI38/VA13  
人胚肺二倍体细胞2BS  
人胚肺二倍体细胞KMB-17  
人肺细胞HLF-a  
人小细胞肺癌细胞DMS 153  
人胚肺细胞 VA13细胞WI-38 VA13亚系 2RA  
人胚肺二倍体细胞HEL-1  
人胚肺细胞系KuMA  
人肺转化细胞系AE1201    
人肺鳞癌细胞NCI-H226  
人胚肺二倍体细胞HEL-2  
人支气管上皮样细胞BEAS-2B  
人胚肺转化细胞SL-1  
人肺腺癌细胞Calu-3  
人小细胞肺癌细胞NCI-H209  
人低分化肺腺癌细胞GLC-82  
人小细胞肺癌细胞NCI-H446  
人非小细胞肺腺癌细胞NCI-H157  
人肺鳞癌细胞NCI-H520  
人肺巨细胞癌高转移细胞株PG-BE1  
人肺巨细胞癌低转移细胞株PG-LH7  
人肺癌细胞A-427  
人低分化肺腺癌细胞SK-LU-1  
人肺支气管癌细胞NCI-H1650  
人非小细胞肺腺癌细胞NCI-H1975  
人非小细胞肺腺癌细胞NCI-H2087  
人小细胞肺癌细胞NCI-H2227  
人非小细胞肺癌细胞NCI-H23  
人肺腺鳞癌细胞NCI-H596  
人非小细胞肺癌细胞NCI-H838  
人肺鳞癌细胞LTEP-s  
人小细胞肺癌细胞LTEP-sm  
人肺鳞癌瘤株LTEP-s  
人肺鳞癌细胞NCI-H1703  
人肺鳞癌细胞NCI-H2170  
人非小细胞肺癌细胞NCI-H524  
人肺腺癌细胞SPC-A1  
人肺癌细胞A549  
人非小细胞肺癌细胞H125  
人肺癌细胞H1299  
人肺癌细胞TKB-1  
人肺腺癌细胞LTEP-a-2  
人肺腺癌细胞Lu-165  
人大细胞肺癌细胞NCI-H460  
人肺腺癌细胞SPC-A-1  
人高转移肺癌细胞095-D  
人肺鳞癌细胞SK-MES-1  
人大细胞肺癌细胞NCI-H661  
人肺黏液上皮样癌细胞NCI-H292  
人肺退行性癌细胞Calu-6  
人肺腺癌细胞NCI-H1395  
人非小细胞肺癌细胞NCI-H358  
人非小细胞肺癌细胞HCC827  
人典型小细胞肺癌细胞NCI-H1688

一、实验目的 
通过实验，掌握空气干燥法制片技术。

二、实验原理
在骨髓细胞中，有丝分裂的指数是相当高的，因此可以直接得到中期细胞而不必像血淋巴细胞那样要经过体外培养。通过骨髓得到染色体是比较简便的，一般也无需无菌操作。在临床上多用于白血病的研究，在实验条件下，这种染色体是机体内真实情况的反映，而且用骨髓制片的方法易于观察毒性物质在体内对细胞和染色体的影响。
直接制片法，是直接从骨髓中取出细胞，经压片法或空气干燥法制片。所谓空气干燥法，实际上是将细胞经过秋水仙素处理 ─ 低渗处理 ─ 充分的固定─ 滴片等步骤之后在载玻片上得到染色体制片的技术。有时，有人把滴片的步骤叫做染色体分散，也有人把这一步和随后的干燥称为空气干燥法。“空气干燥”就是滴片后，不加热或任何处理，使载片在室温下自然干燥的方法。空气干燥法是一个十分有用的基本技术，要熟练掌握。

人肺癌细胞A-427细胞株三、实验材料
小白鼠
四、实验器具和药品试剂
冰箱、离心机、恒温水浴锅、显微镜、分析天平、药物天平、试管架、离心管、吸管、烧杯、量筒、注射器(1ml、5ml)、5号针头、载玻片、解剖盘、解剖刀、剪刀、镊子、酒精灯、切片盒、切片架、纱布。
秋水仙素、柠檬酸钠、氯化钾、冰醋酸、甲醇、磷酸缓冲液、Giemsa、甘油、
硫酸、重铬酸钾。

五、实验方法和步骤 
(一) 秋水仙素处理 取骨髓前3～4小时先给小白鼠经腹腔注入0. 1％的
秋水仙素，注射剂量为4毫克／每公斤动物体重。
(二) 取骨髓 经秋水仙素处理的小白鼠，可用损伤脊髓法处死，然后用剪刀剪开大腿上的皮肤和肌肉，取出大腿骨和胫骨，用一小块纱布来回搓干净附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨两端膨大的关节头，然后将股骨剪碎投入小烧杯中，用2毫升1％柠檬酸钠溶液搅烂碎骨，使骨髓细胞游离出来。静止片刻，用吸管把悬浮液吸到离心管中，可重复冲洗一次。此时离心管中的细胞悬浮液可达 4～5毫升。
(三) 低渗 将所获得的细胞悬浮液*行平衡(注意：每次离心前都要平衡)，然后以 1000rpm离心10分钟，吸去上清液，留0.2ml沉淀物，加0.075M KCL 溶液至8 毫升刻度，将细胞沉淀物吹散打匀，在水浴37℃ 低渗20～30分钟。
(四) 固定 低渗处理后的材料，以1000rpm离心10分钟，吸去上清液，留0.2ml沉淀物，用吸管吹散沉淀物，沿管壁加固定液至6毫升, 冲匀后静止固定20分钟，即*次固定。按上述条件离心，去上清液，再次加入固定液至6ml，进行第二次固定。20分钟后离心吸去上清液，留0.2ml沉淀物,再往沉淀物中滴加4滴固定液，冲匀制成细胞悬液。
(五) 滴片 取事先在冰箱中预冷的载玻片(载玻片须经硫酸洗液浸泡10天以上，经清水冲洗，用蒸馏水浸泡)，滴2～3滴细胞悬液于粘有冰水的载玻片上，用嘴吹气，使细胞迅速分散。将载片插放在切片架上晾干。
(六) 染色 取2张制片平放在玻璃板上，用10：1 Giemsa染液染色20分钟，流水冲洗后晾干即可镜检。
(七) 观察 用中倍镜选择分散适度，不重迭的染色体分裂相，转高倍镜详细观察小白鼠染色体的形态特征，并计算2n的染色体数目。