免疫酶标组织化学法操作说明

    免疫酶标组织化学法原理:标本制备后，首先将其内源酶抑制，接着即可进行免疫酶染色检查。常规的免疫酶染色法可分为直接法和间接法两种。前者固定标本中的抗原直接与酶标抗体结合，达到酶染色目的；后者是抗原先与其抗体(*抗体)结合后，再与酶标抗体(第二抗体)结合，而进行酶染色的。免疫酶染色法的酶底物产物为不溶性物质，可沉着于抗原上，使其显色。间接法虽然多一步骤，但使用范围广。此外，酶标记第二抗体可用酶标记A或生物素与亲和素系统等代替。

以检测空肠弯曲菌为例材料和方法

1 材料

(1) 去除内源性酶试剂：1%H2O2甲醇溶液。

(2) 空肠弯曲菌免疫血清(*抗体)：CjC37(鸡源)和CjP5(猪源)抗血清，自制。

(3) 驴抗兔IgHRP(第二抗体)：自制。

(4) 稀释液与洗液(pH值74 )。

(5) 底物溶液(DABH2O2)：

①TrisHCl缓冲液(pH值76，005mol/L)。

②底物溶液，3，3二氨基联苯胺50mg、TrisHCl缓冲液100ml、过滤，4℃冰箱保存。用前加H2O2，zui终浓度为03%。

2 方法

(1) 标本制备：将疑似空肠弯曲菌病料或其培养物涂片，干燥，然后置除去内源性酶试剂中处理及固定10min。

(2) 冲洗：用冲洗1次，沥干。

(3) 加抗血清：用稀释液对CjC37或CjP5抗血清(针对同源菌)作1∶160稀释，滴加在玻片上，置37℃于湿盒内孵育30min。

(4) 洗涤：3次。

(5) 加酶标记抗体：用稀释液对驴抗兔IgGHRP作1∶500稀释，滴加于玻片上，置37℃于湿盒内孵育30min。

(6) 洗涤：3次。

(7) 滴加底物溶液：室温作用20min，用自来水冲洗，终止反应，干燥，光学显微镜检查。