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今日技术推荐-叶绿素a的测定方法

卡迈舒(上海)生物科技有限公司

2014/6/9 17:53:03

富营养化湖中藻量的测定(叶绿素a法)

一、实验目的

富营养化湖由于水体受到污染,尤以氮磷为甚,致使其中的藻类旺盛生长。此类水体中代表藻类的叶绿素a浓度常大于10微克/升。

本实验通过测定不同水体中藻类叶绿素a浓度,以考查其富营养化情况。

二、器材与用品

1、分光光度计(波长选择大于750nm,精度为0.5-2nm)。

2、比色杯(1cm;4cm)。

3、台式离心机(3500r/min)

4、离心管(15ml具刻度和塞子);冰箱

5、匀浆器或小研钵。

6、蔡氏滤器;滤膜(0.45微克,直径47mm)。

7、真空泵(zui大压力不超过300kpa)。

8、MgCO3悬液:lg MgCO3细粉悬于100ml蒸馏水中。

9、90%的丙酮溶液:90份丙酮+10份蒸馏水。

10、水样:两种不同污染程度的湖水水样各2L.

三、方法和步骤

1、按浮游植物采样方法,湖泊、水库采样500ml,池塘300ml。采样点及采水时间同“浮游植物”。

2、清洗玻璃仪器:整个实验中所使用的玻璃仪器应全部用洗涤剂清洗干净,尤其应避免酸性条件下而引起的叶绿素a分解。

3、过滤水样;在蔡氏滤器上装好滤膜,每种测定水样取50-500ml减压过滤。待水样剩余若干毫升之前加入0.2ml MgCO3悬液、摇匀直至抽干水样。加入MgCO3可增进藻细胞滞留在滤膜上,同时还可防止提取过程中叶绿素a被分解。如过滤后的载藻滤膜不能马上进行提取处理,应将其置于干燥器内,放冷(4℃)暗处保存,放置时间zui多不能超过48小时。

4、提取;将滤膜放于匀浆器或小研钵内,加2-3ml90%的丙酮溶液,匀浆,以破碎藻细胞。然后用移液管将匀浆液移入刻度离心管中,用5ml90%丙酮冲洗2次,zui后向离心管中补加90%丙酮,使管内总体积为10ml。塞紧塞子并在管子外部罩上遮光物,充分振荡,放冰箱避光提取18-24小时。

5、离心:提取完毕后,置离心管于台式离心机上3500r/min,离心10min,取出离心管,用移液管将上清液移入刻度离心管中,塞上塞子,3500r/min在离心10min。正确记录提取液的体积。

6、测定光密度:藻类叶绿素a具有其*的吸收光谱(663nm),因此可以用分光光度法测其含量。用移液管将提取液移入1cm比色杯中,以90%的丙酮溶液作为空白,分别在750、663、645、630nm波长下测提取液的光密度值(OD)。注意:样品提取的OD663值要求在0.2与1.0之间,如不在此范围内,应调换比色杯,或改变过滤水样量。OD663小于0.2时,应该用较宽的比色杯或增加水样量;OD663大于1.0时,可稀释提取液或减少水样滤过量,使用1cm比色杯比色。

7、叶绿素a浓度计算:将样品提取液在663、645、630nm波长下的光密度值(OD663 OD645 OD630)分别减去在750nm下的光密度值(OD750),,此值为非选择性本底物光吸收校正值。叶绿素a浓度计算公式如下:

(1)样品提取液中的叶绿素a浓度Ca为:

Ca(微克/升)=11.64(OD663-OD750)-2.16(OD645-OD750)+0.1(OD630-OD750

  1. 水样中叶绿素a浓度为:

叶绿素a(微克/升)=Ca×v/(V×L)

  1.  

叶绿素a(微克/升)=Ca×v/V×L

Ca:样品提取液中叶绿素a浓度(微克/升)

v :90%丙酮提取液体积(ml)

V:过滤水样的体积(L)

L:比色杯宽度(cm)

四、实验报告

将测定结果记录于表4-1中

表4-1  测定结果

水样

OD750

OD663

OD645

OD630

叶绿素a(微克/升)

A湖水

 

 

 

 

 

B湖水

 

 

 

 

 

根据测定结果,参照表4-1中指标评价被测水样的富营养化程度。

表4-2  湖泊富营养化的叶绿素a评价标准

类  型

指  标

贫营养型

中营养型

富营养型

叶绿素a(微克/升)

<4

4-10

10-150

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