上海源叶生物科技有限公司
2014/8/1 9:56:55试剂：
1. 5x样品缓冲液(10ml):0.6ml 1mol/l的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巯基乙醇，1ml 1%溴酚蓝，0.9ml蒸馏水。可在4℃保存数周，或在-20℃保存数月。
2. 凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月。
3. pH8.9分离胶缓冲液： Tris 36.3g ，加1mol/l HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH8.9，定容至100ml， 4℃保存。
4. pH6.7浓缩胶缓冲液： Tris 5.98g ，加1mol/l HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH6.7，定容至100ml， 4℃保存。
5. TEMED(四乙基乙二胺)原液。
6. 10%过硫酸铵(用重蒸水新鲜配制)。
7. pH8.3 Tris-甘氨酸电极缓冲液：称取Tris 6.0g，甘氨酸28.8g，加蒸馏水约900ml，调pH8.3后，用蒸馏水定容至1000ml。置4℃保存，临用前稀释10倍。
8. 考马斯亮蓝G250染色液：称100mg考马斯亮蓝G250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸，zui后补足水到250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤。
SDS-PAGE 凝胶的有效分离范围
丙烯酰胺浓度(%) 15 12.5 10 7.5 5.0
线性分离范围 15-435kDa 15-60kDa 18-75kDa 30-120 kDa 60-212 kDa
器材
电泳仪 ，电泳槽，水浴锅，摇床。
样品制备
将蛋白质样品与5X样品缓冲液(20μl+5μl)在一个eppendorf 管中混合。放入100℃加热5-10min，离心，取上清点样。
电泳
1. 将玻璃板、样品梳、Spacer用洗涤剂洗净，用ddH2O冲洗数次，再用乙醇擦拭，晾干;
2. 将两块洗净的玻璃板之间加入Spacer，装好玻璃板;
3. 按如下体积配制10%分离胶8.0 ml，混匀;
ddH2O 3.0 ml
1.0 mol/l Tris-HCl pH=8.8 2.1 ml
30% Acr-Bis 2.8 ml
10% SDS 80 μl
10%AP 56 μl
TEMED 6 μl
4. 向玻璃板间灌制分离胶，立即覆一层重蒸水，大约20 min后胶即可聚合;
5. 按如下体积配制6%浓缩胶3.0 ml，混匀;ddH2O 1.0 mol/l Tris-HClpH=6.8 30%
将上层重蒸水倾去Acr-Bis
2.0 ml 400 μl 600 μl
10% SDS 10% AP TEMED
36μl 24μl 4μl
6. 滤纸吸干，灌制浓缩胶，插入样品梳;
7. 装好电泳系统，加入电极缓冲液，上样20 μl;
