恒远针对酶活性抗体相关问题解答？

底物浓度为何能影响酶活性？

这个问题有很多人会问到，我以前也差点混了，好在我的资料里有说，不然还真是很容易搞错。底物浓度不能影响酶活性。影响酶活性的因素，一定会影响酶促反应的速率，但影响酶促反应的速率的因素不一定影响酶的活性，这是易忽略点也是易错点。pH、温度、紫外线、重金属盐、抑制剂、激活剂等通过影响酶的活性来影响酶促反应的速率；酶的浓度、底物的浓度等不会影响酶活性，但可以影响酶促反应的速率。

1．  酶活性和抗体效价测定

采用双向免疫扩散法（稀释抗体）和DAB-H₂O₂ 显色反应检测结合物中抗体效价和免疫沉淀线中的酶促反应。

2．  酶量和IgG量

酶量（mg/ml）=OD403 ′0.4

IgG量（mg/ml）=（OD280- OD402 ′0.42）′0.94′0.62

其中，0.42为酶蛋白本身（0.3）及结合戊二醛后增加的OD值，0.94为抗体蛋白与醛化酶结合后，OD280 约增加6%，故乘以0.94。兔IgG的OD280 =1.0时为0.62.

过碘酸钠标记法IgG量（mg/ml）=（OD280- OD402 ′0.3）′0.94′0.62

标记率= OD403 / OD280 =0.3-0.6，即一个抗体分子上结合1-2个HRP分子.标记率可以大于0.6-0.9。OD403 / OD280 =0.4，约相当于E/P=1.0。

酶标抗体的保存

经鉴定合格的酶标抗体，由于硫化物及叠氮化物等可与酶结合，使HRP失活，因此，不能用硫化物及叠氮化物作为防腐剂，可加入等量的60%甘油，小量分装（0.5ml/支），置4℃~-30℃保存。